Role of mitochondrial proteins in the pathophysiology and therapeutics of degenerative diseases

 
δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου
στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*
κοινοποιήστε το τεκμήριο




2007 (EL)
Ρόλος μιτοχονδριακών πρωτεϊνών στην παθοφυσιολογία και θεραπευτική εκφυλιστικών παθήσεων
Role of mitochondrial proteins in the pathophysiology and therapeutics of degenerative diseases

Φολτοπούλου, Παρθένα Φ.

Στα πλαίσια της παρούσας διατριβής, έγινε η ετερόλογη παραγωγή στην Ε. coli της ώριμης πρωτεϊνης Sco2w/t(42-266aa), καθώς και των δύο μεταλλαγμένων μορφών της Sco2 πρωτεϊνης(Sco2e140k και Sco2s225f), ως χιμαιρικά μόρια με την ιντεϊνη, με τη χρήση του πλασμιδιακού φορέα pTYB11, και κατέστη δυνατός ο καθαρισμός τους μέσω χρωματογραφίας αγχιστείας. Στόχος ήταν η μελέτη της επίδρασης των σημειακών μεταλλάξεων (E140K, S225F) στη λειτουργία και φυσιολογική συμπεριφορά της μιτοχονδριακής πρωτεϊνης Sco2 όπως και στην ικανότητα σύνδεσης της με το χαλκό(Foltopoulou et al., 2004). Στην προσπάθεια ενδοκυτταρικής μεταγωγής της ανασυνδυαμένης αγρίου τύπου L-Sco2w/t πρωτεϊνης(πλήρους μεγέθους, 266aa) και ακόλουθης μεταφοράς στα μιτοχόνδρια, χρησιμοποιήθηκε η νέα τεχνολογία μεταγωγής πρωτεϊνών μέσω των PTDs(Protein Transduction Domains). Η αγρίου τύπου πρωτεϊνη L-Sco2w/t(266aa), εκφράστηκε ως χιμαιρικό μόριο είτε με την ιντεϊνη(ιντεϊνη-TAT-L-Sco2-HA)είτε με την αλληλουχία δέκα(10) ιστιδινών(10xHis-XAsite-TAT-L-Sco2-HA) μαζί με τις αλληλουχίες του TAT-PTD και του HA, με τη χρήση των πλασμιδιακών φορέων pTYB11 και pET-16b, αντίστοιχα. Μεταγωγή της ανασυνδυασμένης πρωτεϊνης σε κύτταρα γλοιώματος(κυτταρική σειρά U-87 MG) και μελέτη με πειράματα, τόσο υποκυτταρικής κατανομής όσο και με μικροσκοπία ανοσοφθορισμού, έδωσαν τις πρώτες ενδείξεις για εντόπιση της ανασυνδυασμένης αυτής πρωτεϊνης στα μιτοχόνδρια των ευκαρυωτικών κυττάρων
Within the scope of present thesis, the point mutations(E140K, S225F) of SCO2 gene were studied. Wild type and mutants of SCO2 gene were cloned and expressed as heterologous proteins in E. coli cells, using fusion cloning and expression vector system(IMPACT^tm-CN, pTYB11). Wild type and mutated forms of Sco2 were prepared as recombinant proteins and examined for their physical state, condormation and thei ability to bind cooper. SDS-PAGE electrophoresis analysis revealed that Sco2^e140k και Sco2s225f mutant forms of Sco2 protein are quite different from their wild type counterpart in physical state and copper capacity. Circular dichroism(CD) spectroscopy and thermal denaturation studies confirmed difference, supporting the motion that the two point mutations alter both the physical state and the binding capacity of Sco2 proteins(Foltopoulou et al., 2004). Combinatorial Cloning Technology complemented by the novel Protein Transduction Technology(PTD) was applied in order to attempt targeted intracellular delivery of human recombinant Sco2 protein in eukaryotic cells. Wild type recombinant Sco2 fusion protein, bearing also the TAT domain as PTD, His-tag and HA-tag, produced in genetically modified E. coli cells. This hererologous protein was resolved, refolded and delivered in culture of U-87 MG glioma cells. Preliminary immunofluorescent data, followed by subcellular localization, SDS-PAGE electrophoresis and Western Blotting analysis revealed that recombinant Sco2 protein had been delivered into mitochondria of mammalian cells

PhD Thesis / Διδακτορική Διατριβή
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis

Τεχνολογία των PTDS
Protein trnansduction
PTDs technology
Πρωτεϊνες μεμβρανών
Οξείδωση του κυτοχρώματος C
Πρωτεϊνες
Membrane proteins
Sco2 protein
Proteins
Μεταγωγή πρωτεϊνών
Mitochondria
Cytochrome C oxidase
Μιτοχόνδρια
Sco2 πρωτεϊνη
Copper binding

Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης (EL)
Aristotle University of Thessaloniki (EN)

Ελληνική γλώσσα
Αγγλική γλώσσα

2007
2009-06-21T21:00:00Z


Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης, Σχολή Επιστημών Υγείας, Τμήμα Φαρμακευτικής

This record is part of 'IKEE', the Institutional Repository of Aristotle University of Thessaloniki's Library and Information Centre found at http://ikee.lib.auth.gr. Unless otherwise stated above, the record metadata were created by and belong to Aristotle University of Thessaloniki Library, Greece and are made available to the public under Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International license (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0). Unless otherwise stated in the record, the content and copyright of files and fulltext documents belong to their respective authors. Out-of-copyright content that was digitized, converted, processed, modified, etc by AUTh Library, is made available to the public under Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International license (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0). You are kindly requested to make a reference to AUTh Library and the URL of the record containing the resource whenever you make use of this material.
info:eu-repo/semantics/openAccess



*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.