Ο έλεγχος καταλοίπων φαρμακευτικών χημικών ουσιών στα ζώα και τα τρόφιμα βασίζεται στην εφαρμογή ενός Εθνικού Προγράμματος Ελέγχου, σύμφωνα με την υφιστάμενη Κοινοτική και Εθνική Νομοθεσία (Οδηγία S6/469/EOK1, Π.Δ.497/892, Κανονισμός (ΕΟΚ) 2377/903, Οδηγία 96/23/ΕΕ4). Στις υποχρεώσεις μας ως Εθνικού Εργαστηρίου Αναφοράς για την ορθή εκτέλεση αυτού του προγράμματος, εκτός από τους ελέγχους διερεύνησης, περιλαμβάνονται και οι επιβεβαιωτικοί έλεγχοι. Με στόχο την ανάπτυξη και βελτιστοποίηση επιβεβαιωτικών μεθόδων και για τον τομέα των αντιμικροβιακών παραγόντων τυποποιήσαμε μια αναλυτική μέθοδο για τον προσδιορισμό και την ταυτοποίηση των σουλφοναμιδών, ουσιών οι οποίες χρησιμοποιούνται εκτενέστατα τόσο στην προληπτική όσο και στη θεραπευτική κτηνιατρική. Η μέθοδος των Diserens και συν. 19915 με δικές μας τροποποιήσεις, χρησιμοποιείται στο εργαστήριο μας για την επιβεβαίωση των υπόπτων, από τη βιολογική Μέθοδο των Τεσσάρων Τρυβλίων (Four Plate Test)6, δειγμάτων νεφρού και κρέατος που μας αποστέλλονται από τα Περιφερειακά Εργαστήρια του Υπουργείου Γεωργίας. Η μέθοδος περιλαμβάνει την εκχύλιση και παραλαβή των σουλφοναμιδών με εκχύλιση στερεάς φάσης (SΡΕ) και την ανίχνευση, ταυτοποίηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό τους με Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης και ανιχνευτή πολλαπλών φωτοδιόδων (HPLC/UV, PDA detector). Η στήλη που χρησιμοποιήθηκε ήταν η Hypersil ODS, 5 μηι (250 x 4.6 mm) με πρόγραμμα βαθμιαίας έκλουσης (gradient) 0.01Μ οξικού αμμωνίου pH 4.6/Μεθανόλης. Το μήκος κύματος ήταν 266 nm, η ροή κινητής φάσης 1.1 mL.min-1 και ο όγκος έγχυσης 20 μL. 12 σουλφοναμίδες μπορούν να προσδιορισθούν με μια ανάλυση σε συγκεντρώσεις έως και 20 μg/kg, η δε ανάκτηση της μεθόδου κυμάνθηκε από 60 έως 88% για δείγματα επιβαρημένα στοΑνώτατο Επιτρεπτό Όριο (MRL) των 100 μg/kg.
(EL)
Residue monitoring in animal husbandry and in food of animal origin is based on the implementation of a Surveillance Scheme, according to the legislation (Directive 86/469/EEC1, N. D. 497/89% Regulation (EEC) 2377/903, Directive 96/23/EU4). Among our obligations as a European Union National Reference Laboratory (EU-NRL), we have to develope screening and confirmatory methods. Towards the development and validation of these confirmatory techniques, als for the group of antimicrobials, a method has been developed for sulfa drug determination. These substances are used extensively in livestock for therapeutic as well as for growth promotin purposes. Diserens et al., 19915 method with our modifications, is used in our laboratory to confirm the Four Plate Test6 suspect kidney and meat samples sent from the Regional Field Laboratories (RFLs) of the Ministry of Agriculture. The method's steps are: extraction, concentration and quantitative elution of sulfa drugs using Solid Phase Extraction (SPE) and their identification, confirmation and quantitation by HPLC/UV with a Photo Diode Array detector. The column used was Hypersil ODS, 5 μιη (250 x 4.6 mm) and the mobile phase was 0.01 M ammonium acetate buffer pH 4.6/MeOH at a gradient mode. The wavelength was monitored at 266 nm, the flow rate of the mobile phase was l.lmL.min ' and the injection volume was 20 μL. 12 sulfonamides can be simultaneously detected in one run at concentrations as low as 20 μg/kg. The recovery ranges from 60 to 88% for spiked samples at the Maximum Residue Limit of 100 μg/kg.
(EN)
