Ο συστηματικός ερυθηματώδης λύκος (ΣΕΛ) είναι μία συστηματική αυτοάνοση νόσος, με κύριο χαρακτηριστικό την παρουσία υψηλού τίτλου αυτοαντισωμάτων, τα οποία παράγονται από μακρόβια πλασματοκύτταρα. Δεδομένα από in vivo και in vitro μελέτες έχουν αναδείξει τα ενεργοποιημένα Β λεμφοκύτταρα ως κεντρική συνιστώσα της αιτιοπαθογένεσής του. Η βέλτιστη ενεργοποίηση των Β λεμφοκυττάρων προϋποθέτει συγκλίνοντα σήματα από τον υποδοχέα των Β λεμφοκυττάρων, υποδοχείς τύπου Toll καθώς και συνδιεγερτικά μόρια, ενώ μπορεί να επηρεαστεί από ανασταλτικούς υποδοχείς, όπως ο BTLA (B and T lymphocyte Attenuator), ο PD-1 (Programmed cell death protein 1) και ο PD-L1 (Programmed cell death 1 ligand 1).
Η παρούσα μελέτη αποσκοπεί στη διερεύνηση της έκφρασης και της λειτουργίας των ανασταλτικών υποδοχέων BTLA, PD-1 και PD-L1 σε Β λεμφοκύτταρα από υγιείς δότες και ασθενείς με ΣΕΛ. Η έκφραση των BTLA, PD-1 και PD-L1 εξετάστηκε με κυτταρομετρία ροής σε άωρα Β λεμφοκύτταρα (CD19+IgD+CD27-), μεταβατικά Β λεμφοκύτταρα (CD19+IgD+CD27+), Β λεμφοκύτταρα μνήμης (CD19+IgD-CD27+) και πλασματοκύτταρα (CD19+IgD-CD27hi) σε βασική κατάσταση και σε απομονωμένα CD19+ Β λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος μετά από ενεργοποίηση. Η έκφραση του συνδέτη του BTLA, HVEM (Herpes Virus Entry Mediator), εξετάστηκε επίσης σε CD4+ Τ λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος. Η ενεργοποίηση, η διαφοροποίηση και ο πολλαπλασιασμός των Β λεμφοκυττάρων, καθώς και η παραγωγή ιντερλευκίνης-6 από αυτά διερευνήθηκαν παρουσία και απουσία του HVEM. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων κατέδειξε πως υπάρχει διαφορετική έκφραση των τριών υποδοχέων στους υποπληθυσμούς των Β λεμφοκυττάρων τόσο υγιών δοτών όσο και ασθενών με ΣΕΛ. Τα επίπεδα του HVEM ήταν σημαντικά αυξημένα στα CD4+ Τ λεμφοκύτταρα ασθενών με ΣΕΛ. Η ενεργοποίηση του υποδοχέα των Β λεμφοκυττάρων οδήγησε σε αύξηση της έκφρασης και των τριών υποδοχέων σε Β λεμφοκύτταρα υγιών, η προσθήκη CpG ολιγοδεοξυνουκλεοτιδίων (συνδέτης υποδοχέα τύπου Toll-9) αύξησε περαιτέρω τα επίπεδα των PD-1 και PD-L1, αλλά όχι και του BTLA, ενώ η προσθήκη ιντερλευκίνης-4, ιντερλευκίνης-10 και ιντερλευκίνης-21 μείωσε τα επίπεδα του BTLA. Τέλος, η προσθήκη του συνδέτη του BTLA, HVEM, σε καλλιέργειες Β λεμφοκυττάρων μετρίασε τα επίπεδα δεικτών
10
ενεργοποίησης (CD80/CD86), ελάττωσε τη διαφοροποίησή τους σε πλασματοκύτταρα και τον πολλαπλασιασμό τους, αλλά είχε διαφορετική επίδραση στην παραγωγή ιντερλευκίνης-6 από Β λεμφοκύτταρα ασθενών με ΣΕΛ σε σχέση με υγιείς δότες. Συνοψίζοντας, τα παραπάνω ευρήματα καταδεικνύουν ένα διαφορετικό πρότυπο έκφρασης των τριών υποδοχέων, BTLA, PD-1 και PD-L1, το οποίο δύναται να παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ενεργοποίησης και διαφοροποίησης των Β λεμφοκυττάρων. Παρεκκλίσεις στη λειτουργία και έκφραση των ανασταλτικών υποδοχέων των Β λεμφοκυττάρων θα μπορούσαν να οδηγούν σε ενίσχυση της ικανότητας τους για παραγωγή αυτοαντισωμάτων συμβάλλοντας, κατ’επέκταση, στην παθογένεια του ΣΕΛ.
(EL)
Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disorder characterized by the presence of high-titer autoantibodies produced by long-lived plasma cells. Evidence from in vivo and in vitro studies have established activated B cells as an important component of its pathogenesis. Optimal B cell activation and differentiation requires convergent signals from the B cell receptor (BcR), Toll-like receptors (TLRs) as well as costimulatory molecules, whereas B cells can also be influenced by inhibitory immunoreceptors, such as B and T lymphocyte Attenuator (BTLA), Programmed cell death protein 1 (PD-1) and Programmed cell death 1 ligand 1 (PD-L1). This study aimed at investigating the expression and function of the coinhibitory receptors BTLA, PD-1 and PD-L1 in B cells from healthy donors and active SLE patients. BTLA, PD-1 and PD-L1 expression was examined by flow cytometry in peripheral blood naïve (CD19+IgD+CD27-), transitional (CD19+IgD+CD27+), memory (CD19+IgD-CD27+) and plasma B cells (CD19+IgD-CD27hi) at basal state and in purified peripheral blood CD19+ B cells following stimulation. BTLA ligand, HVEM (Herpes Virus Entry Mediator), expression was also considered in peripheral blood CD4+ T cells. Activation, differentiation, proliferation and IL-6 production of B cells were examined in the presence or absence of the BTLA ligand, HVEM. Analysis resulted in differential baseline expression of all three receptors studied in B cell subsets both in healthy donors and in SLE patients. HVEM levels were found to be significantly increased in SLE CD4+ T cells. BcR activation enhanced the expression all three receptors in normal B-cells; addition of CpG-ODN (TLR9 ligand) further induced PD-1 and PD-L1 –but not BTLA– expression, whereas addition of the cytokines IL-4, IL-10 or IL-21 reduced PD-1 and BTLA levels. In vitro cross linking of BTLA with HVEM resulted in decreased expression of activation markers CD80/CD86 and differentiation, in attenuation of B cell proliferation, although it had a differential effect on IL-6 production in B cells from SLE patients compared to healthy controls. In conclusion, these data demonstrate a different pattern of expression of BTLA, PD-1 and PD-L1 among B cell subsets and upon treatment with stimuli, with important implications for the modulation of B cell activation and differentiation.
14
Aberrancies in the expression and function of coinhibitory receptors in B cells could contribute to enhanced autoantibody-forming capacity and disease pathogenesis.
(EN)
