Ο ρόλος των αμινοξέων του δεύτερου εξωκυττάριου βρόγχου του τύπου 1 υποδοχέα του εκλυτικού παράγοντα της κορτικοτροπίνης στην ενεργοποίησή του
The role of the aminoacids of the second extracellular loop of type 1 receptor of the corticotropin releasing factor in the activation of the receptor
Χριστοπούλου, Καλλιόπη
Λιαπάκης, Γεώργιος
Κατερινόπουλος Χαράλαμπος
Ο τύπος 1 υποδοχέα (CRF1R) του εκλυτικού παράγοντα της κορτικοτροπίνης (CRF) συγκαταλέγεται στη οικογένεια Β των υποδοχέων, οι οποίοι συζεύγνυνται με τις G-πρωτεΐνες, (G-protein coupled receptors, GPCRs) και συγκεκριμένα με τις Gs πρωτεΐνες οι οποίες διεγείρουν το ενζυμο της αδενυλικής κυκλάσης. Ο CRF1R, αποτελείται από 7 διαμεμβρανικές περιοχές (TMs), οι οποίες ενώνονται μεταξύ τους με τρεις εξωκυττάριους και τρεις ενδοκυττάριους βρόγχους. Αυτό αποτελεί χαρακτηριστικό δομικό γνώρισμα των GPCRs. Προηγούμενες μελέτες του εργαστηρίου όσο και άλλων ερευνητικών ομάδων έχουν δείξει το σημαντικό ρόλο του δεύτερου εξωκυττάριου βρόγχου του CRF1R στη λειτουργία του υποδοχέα. Προκαταρκτικές μοριακές προσομοιώσεις του CRF1R στο εργαστήριο μας έδειξαν ότι το ασπαραγινικό οξύ στη θέση 269 (Asp269) του δεύτερου εξωκυττάριου βρόγχου παίζει ρόλο στη λειτουργία του υποδοχέα, χωρίς όμως να έχει πειραματικά επαληθευτεί.
Έχοντας ως σκοπό τη μελέτη του λειτουργικού ρόλου του Asp269 του CRF1R, μεταλλάξαμε το αμινοξύ αυτό σε αλανίνη, δημιουργώντας έτσι τον μεταλλαγμένο υποδοχέα CRF1R -D269A και εξετάσαμε την επίδραση της μετάλλαξης αυτής στη λειτουργία του υποδοχέα. Συγκεκριμένα εξετάστηκε η επίδραση της D269A μετάλλαξηςστην ισχύ της σοβαγίνης με την οποία διεγείρει τη παραγωγή ενδοκυττάριου κυκλικού ΑΜΡ σε κύτταρα που εκφράζουν σταθερά τον CRF1R.
Τα αποτελέσματα έδειξαν πως η κατάργηση του αρνητικά φορτισμένου φορτίου στη θέση 269 του CRF1R μετά την D269A μετάλλαξη μείωσε την ισχύ της σοβαγίνης για τον CRF1R, οδηγώντας στο συμπέρασμα ότι το Asp269 του δεύτερου εξωκυττάριου βρόγχου του CRF1R παίζει ρόλο στην ενεργοποίηση του υποδοχέα.
(EL)
