68 σ.
Ο σκοπός της παρούσας πτυχιακής εργασίας είναι η ανάλυση της πρόσδεσης της πρωτεΐνης HURP στη μιτωτική άτρακτο σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού. Η πρωτεΐνη HURP (Hepatoma Up Regulated Protein) ανακαλύφθηκε πρώτη φορά σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Είναι μια πρωτεΐνη που σχετίζεται με τους μικροσωληνίσκους καθώς έχει βρεθεί ότι εντοπίζεται κοντά σε αυτούς και τους σταθεροποιεί κατά τη διάρκεια της κυτταρικής διαίρεσης. Η HURP ανήκει σε ένα σύμπλοκο πρωτεϊνών που ενεργοποιείται από την G πρωτεΐνη Ran-GTP. Το σύμπλοκο αυτό είναι υπεύθυνο για το σχηματισμό της μιτωτικής ατράκτου, για τον πολυμερισμό και τη σταθεροποίηση των μικροσωληνίσκων, καθώς και για τη σωστή διεξαγωγή της μίτωσης. Το γονίδιο της HURP είναι επομένως ένα ρυθμιστικό γονίδιο που ενέχεται στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου. Στο πειραματικό μέρος αυτής της πτυχιακής εργασίας μελετήθηκε η πρωτεΐνη HURP σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού. Πιο συγκεκριμένα οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιήθηκαν είναι οι εξής: MDA MB 231, MDA MB 436, MDA MB 435S, MCF7 και T47D. Η κάθε κυτταρική σειρά αντιστοιχεί σε ένα διακριτό στάδιο καρκίνου του μαστού. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν και ακολούθησαν πειράματα Ανοσοφθορισμού και Western blot, καθώς και παρατήρηση σε συνεστιακό μικροσκόπιο. Τα αποτελέσματά μας αφορούν τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης HURP στα κύτταρα, καθώς και την κατανομή της πρωτεΐνης κατά μήκος του άξονα της μιτωτικής ατράκτου. Σύμφωνα με τις παρατηρήσεις μας η πρωτεΐνη HURP εκφράζεται σε υψηλά επίπεδα σε κύτταρα μεταστατικών/διηθητικών όγκων του μαστού (πχ. MDA MB 231), ενώ υπάρχει σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις σε κύτταρα με λιγότερο ή καθόλου μεταστατικό χαρακτήρα (πχ ΜCF7, Τ47D). Η κατανομή της πρωτεΐνης σε διαιρούμενα κύτταρα είναι πάνω στους μικροσωληνίσκους της ατράκτου και μάλιστα κοντά στα χρωμοσώματα. Οι παρατηρήσεις αυτές συσχετίστηκαν και με προηγούμενα πειράματα του εργαστηρίου, στις ίδιες κυτταρικές σειρές, για την ανθεκτικότητά τους στο αντικαρκινικό φάρμακο ταξόλη (Taxol). Το συμπέρασμα στο οποίο καταλήγουμε, είναι ότι η πρωτεΐνη HURP έχει πολύ βασικό ρόλο στην κυτταρική διαίρεση και γι’ αυτό ίσως να σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου. Το συμπέρασμα στο οποίο καταλήγουμε, είναι ότι η πρωτεΐνη HURP έχει πολύ βασικό ρόλο στην κυτταρική διαίρεση και γι’ αυτό ίσως να σχετίζεται με την εξέλιξη του καρκίνου.
The purpose of this thesis is to analyze HURP protein binding on the mitotic spindle in breast cancer cell lines. HURP (Hepatoma Up Regulated Protein) was first discovered in hepatocellular carcinoma cells. It is a protein associated with microtubules as it has been found to be located near them and stabilizes them during cell division. HURP belongs to a protein complex activated by Ran-GTP protein. This complex is responsible for the assembly of the mitotic spindle, for the polymerization and stabilization of microtubules, as well as for the proper conduction of mitosis. HURP gene is therefore a regulatory gene involved in the progression of the cell cycle. In the experimental part of this thesis, HURP protein was studied in breast cancer cell lines. More specifically, those cell lines are: MDA MB 231, MDA MB 436, MDA MB 435S, MCF7 and T47D. Each cell line corresponds to a discrete stage of breast cancer. The cells were cultured, and then followed by Immunofluorescence and Western blotting experiments, as well as confocal microscopic observation. Our results relate to levels of HURP protein expression in cells, as well as the distribution of protein along the axis of the mitotic spindle. According to our observations, HURP protein is expressed in high levels in metastatic breast tumors (MDA MB 231), and is present at lower concentrations in cells with less or no metastatic character (MCF7, T47D). The distribution of the protein in dividing cells is on the microtubules of the spindle and close to the chromosomes. These observations have also been correlated with previous laboratory experiments, in same cell lines, for their resistance to taxol, an anti-cancer drug (Taxol). The conclusion of our experiments is that HURP protein has a crucial role in cell division and may therefore be related to breast tumorigenesis.
Βιβλιογραφία : σ. 63-68
Democritus University of Thrace
