Η πρωτεΐνη Παράγοντας Νέκρωσης Όγκων (Tumor Necrosis Factor alpha, TNFα) είναι μια προφλεγμονώδης κυτταροκίνη που βρίσκεται φυσικώς στον οργανισμό και παίζει κυρίαρχο ρόλο στην άμυνα αυτού ενάντια σε βακτηριακές μολύνσεις και σε τοπικά τραύματα. Η TNFα επάγει φλεγμονώδεις αντιδράσεις και παίζει κεντρικό ρόλο σε φλεγμονώδη αυτοάνοσα νοσήματα, νοσήματα του Κεντρικού Νευρικού Συστήματος και είναι παράγοντας κινδύνου ογκογένεσης. Η διαλυτή μορφή της (sTNFα) έχει 157 αμινοξέα. Για να αντιμετωπιστούν οι αρνητικές επιπτώσεις που προκαλεί η συμμετοχή της TNFα σε παθολογικές καταστάσεις, έχουν δημιουργηθεί φαρμακευτικά προϊόντα που είναι ανταγωνιστές της TNFα, όπως τα αντι-TNFα μονοκλωνικά αντισώματα.
Στην παρούσα ερευνητική εργασία παρουσιάζεται η προσπάθεια σύνθεσης του τμήματος 1-68 της πρωτεΐνης TNFα μέσω της Πεπτιδικής Χημείας. Το εν λόγω πεπτιδικό τμήμα χωρίστηκε καταλλήλως σε μικρότερα τμήματα τα οποία συντέθηκαν μέσω Σταδιακής Σύνθεσης σε στερεή φάση και χρησιμοποιήθηκαν ώστε ολόκληρη η αλληλουχία να συντεθεί μέσω Τμηματικής Συμπύκνωσης σε στερεή φάση, χρησιμοποιώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία πάνω στη 2-χλωροτρίτυλο χλωρίδιο ρητίνη (CTC). Μόλις ολοκληρώθηκε η σύνθεση του τμήματος 1-68 σχηματίστηκε ο πεπτιδικός θειοεστέρας του και έγινε προσπάθεια σύνδεσής του μέσω Φυσικής Χημικής Σύνδεσης (Native Chemical Ligation) με το τμήμα 69-157, ώστε να ελεγχθεί αν είναι δυνατή η σύνδεση των δύο τμημάτων ώστε να προκύψει ολόκληρη η πρωτεΐνη TNFα.
(EL)
The Tumor Necrosis Factor alpha (TNFα) protein is a proinflammatory cytokine that naturally occurs inside the body and plays a leading role in the host defense mechanism against bacterial infections and in local injury. TNFα induces inflammatory responses and plays a key role in immune-mediated inflammatory diseases, diseases of the Central Nerve System and is a risk factor in tumor genesis. The soluble form of TNFα (sTNFα) consists of 157 amino acid residues. In order to deal with the negative effects which are induced by the involvement of TNFα in pathological events, some pharmaceutical products have been developed which are TNFα antagonists, such as the anti-TNFα monoclonal antibodies.
This dissertation presents the effort to synthesize through Peptide Chemistry the peptide segment 1-68 of the TNFα protein. The said segment was properly divided into smaller fragments which were synthesized through Step-by-step solid phase Synthesis and where later used as building blocks of the sequence through Solid Phase Fragment Condensation, using the Fmoc/tBu methodology on 2-chlorotrityl chloride resin (CTC). Following the synthesis of the 1-68 segment, its peptide thioester was formed and the Native Chemical Ligation reaction with the 69-157 segment was attempted in order to check if the connection of the two parts was possible, which would result in the synthesis of the TNFα complete sequence.
(EL)
University of Patras
