δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*
Απλές χημειοφωταυγειομετρικές μέθοδοι προσδιορισμού ενζύμων και νουκλεϊκών οξέων με φωτογραφική μηχανή ως ανιχνευτή
(EL)
Simple chemiluminescent methods for enzymes and nucleic acids detection with digital camera as a detector
(EL)
In recent years, photographic applications as a means of detection in molecular studies, are being developed and optimized rapidly with the most established use of CCD cameras, such as DNA microarrays, while even the detection of monofunctional polymorphisms (SNPs) with a smartphone camera has been reported.
In the present study chemiluminescent reactions have been detected using a digital SLR camera. Photoshooting conditions and the analysis of the received photographs were both optimized.
Images were analyzed and quantified by Image J software, a recently developed by the U.S. National Institutes of Health, with a variety of applications in image processing and health analyses.
Alkaline phosphatase (ALP) was selected as analyte in milk samples. As second analyte, a cDNA fragment of the HPPR1 gene (hypoxanthine phosphoribosyl transferase) and its internal standard were used.
ALP has been approved by many countries as a standard test for rapid validation of the milk pasteurization process due to its higher than pathogenic bacteria thermal resistance, therefore the ALP’s inactivation indicates the death of pathogenic bacteria.
The sequence of the HPRT1 gene was selected as an analyte in a complex reaction process, through hybridization methods, including the immobilization and chemiluminescence detection of double-stranded DNA sequences with a camera.
This diploma thesis describes the study of the conditions of signal reception and processing as well as the experimental procedures concluding each experimental part with calibration curves for each analyte.
(EL)
Οι εφαρμογές της φωτογράφισης ως μέσο ανίχνευσης σε μοριακές μελέτες αναπτύσσονται και βελτιστοποιούνται ταχέως τα τελευταία χρόνια με την πλέον θεμελιωμένη χρήση CCD κάμερας, όπως στις μικροσυστοιχίες DNA και άλλες μεθόδους, ενώ έχει αναφερθεί ακόμα και ανίχνευση μονονουκλεοτιδικών πολυμορφισμών (SNPs) με κάμερα από smartphone.
Στην παρούσα μελέτη γίνεται ανίχνευση χημειοφωταυγών αντιδράσεων με τη χρήση ψηφιακής SLR κάμερας και βελτιστοποιήσεις τόσο στις συνθήκες της φωτογράφισης όσο και στην ανάλυση των λαμβανόμενων φωτογραφιών. Οι φωτογραφίες αναλύονται και ποσοτικοποιούνται μέσω του ειδικού λογισμικού Image J, ενός πρόσφατα αναπτυγμένου από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας των ΗΠΑ πρόγραμμα με ποικίλες εφαρμογές στην επεξεργασία εικόνων που αφορούν και αναλύσεις στον τομέα της υγείας.
Ως αναλύτες επιλέχθηκαν η αλκαλική φωσφατάση (ALP) σε δείγματα γάλακτος, καθώς και ένα τμήμα του cDNA του γονιδίου του HPRT1 (φωσφοριβοσυλοτρανφεράση της υποξανθίνης) και του εσωτερικού του προτύπου (Internal Standard, IS).
Η ALP έχει εγκριθεί από πολλές χώρες ως πρότυπη δοκιμασία για ταχεία επικύρωση της διαδικασίας παστερίωσης του γάλακτος λόγω της μεγαλύτερης ανθεκτικότητάς της στη θερμική επεξεργασία από ότι τα παθογόνα βακτήρια, οπότε η αδρανοποίηση της ίδιας συνεπάγεται θανάτωση και των παθογόνων βακτηρίων.
Η αλληλουχία του γονιδίου του HPRT1 επιλέχθηκε ως αναλύτης σε μια σύνθετη διαδικασία αντιδράσεων, μέσω μεθόδων υβριδοποίησης, που περιλαμβάνουν την ακινητοποίηση και χημειοφωταυγειομετρική ανίχνευση δίκλωνων αλληλουχιών DNA με φωτογραφική μηχανή.
Στην παρούσα διπλωματική εργασία περιγράφονται οι μελέτες των συνθηκών της λήψης και επεξεργασίας του σήματος, αλλά και των πειραματικών διαδικασιών κλείνοντας το κάθε πειραματικό μέρος με καμπύλες βαθμονόμησης για το κάθε μόριο- αναλύτη.
(EL)
*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.
Βοηθείστε μας να κάνουμε καλύτερο το OpenArchives.gr.
Πανεπιστήμιο Πατρών
