The Malignant Pleural Mesothelioma (MPM) is an aggressive cancer of the human pleural. The median survival is almost 9-18 months. The development of MPM is mainly associated with exposure to asbestos fibres and is accompanied with Malignant Pleural Effusion (MPE). The nuclear factor -κB (NF–κΒ) is activated and involved in the pathogenesis of many malignancies; however, aiming recently the signaling of NF-κB in cell lines of MPM with the proteasome inhibitor Bortezomib, was not adequate to determine its role in the formation of the disease.The presenting dissertation aims to determine the role of kinases IKKα and IKKβ that are actively involved in the activation of the transcription factor – κB by using in vitro models of gene silencing and in vivo formation of MPM. First, the expression profile of NF–κΒ was studied in cell lines of human MPM and MPM formed in mice, using Western blot. Next, the expression of kinases IKKα and IKKβ were determined using immunohistochemistry in tissue sections, which were isolated from C57BL/6 and BALB/c mice after intrapleural transplant of MPM cell lines (AB2, KPM). Afterwards, shRNA silencing of the expression of each kinase was insertedin the 2 cancer cell lines. In order to determine the role of kinases in the cell lines AB2& KPM, in vitro assays including shRNA transduction, tumor cell proliferation and the ability of colony formation were performed. Finally, in order to study their participation in the primary tumour and MPM formation, these cell lines were transplanted subcutaneously and intrapleuraly in specific mice. Activation both of the subunits of the canonical and mainly of the alternative pathway of NF-κB as well as, of the two kinases were located in MPM. The two kinases, are proved to be essential in the function of the MPM cell lines whereas IKKα is proved to play a more important role. Their function seems to be necessary in the primary tumour formation and in the MPM formation and development. This fact establishes the kinases as possible therapeutical targets.
Το Κακοήθες Υπεζωκοτικό Μεσοθηλίωμα (ΚΥΜ) είναι ένα επιθετικό νεόπλασμα του υπεζωκότα του ανθρώπου. Ο μέσος όρος επιβίωσης αγγίζει τους 9-18 μήνες. Η ανάπτυξή του σχετίζεται κυρίως με την έκθεση σε ίνες αμιάντου και συνοδεύεται με Κακοήθη Υπεζωκοτική Συλλογή (ΚΥΣ). Ο πυρηνικός παράγοντας -κB (NF–κΒ), ενεργοποιημένος, εμπλέκεται στην παθογένεια πολλών κακοηθειών, ωστόσο η πρόσφατη στόχευσή του σε κύτταρα ΚΥΜ με τον αναστολέα πρωτεασώματος Bortezomib, δεν ήταν αρκετή για να αποσαφηνιστεί ο ρόλος του στην ανάπτυξη της νόσου. Η παρούσα εργασία στοχεύει στον προσδιορισμό του ρόλου των κινασών IKKα και IKKβ που εμπλέκονται ενεργά στην ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα -κB χρησιμοποιώντας μοντέλα in vitro γονιδιακής αποσιώπησης και in vivo πρόκλησης ΚΥΜ. Αρχικά, μελετήθηκε το προφίλ έκφρασης του NF–κΒ σε κυτταρικές σειρές ΚΥΜ ανθρώπου και ποντικού με ανοσοαποτύπωση κατά Western. Στη συνέχεια, προσδιορίστηκε η έκφραση των κινασών IKKα και IKKβ με ανοσοϊστοχημεία σε ιστολογικές τομές οι οποίες απομονώθηκαν από ποντικούς C57BL/6 και BALB/c μετά από εμφύτευση ενδοϋπεζωκοτικά των κυτταρικών σειρών ΚΥΜ (AB2, KPM). Κατόπιν, πραγματοποιήθηκε shRNA αποσιώπηση για κάθε κινάση στις 2 καρκινικές κυτταρικές σειρές. Για να προσδιοριστεί ο ρόλος των κινασών στις σειρές AB2&KPM, ελέγχθησαν ο ρυθμός κυτταρικού πολλαπλασιασμού και η ικανότητα δημιουργίας κυτταρικών αποικιών. Τέλος, για να μελετηθεί η συμμετοχή τους στην δημιουργία πρωτοπαθούς όγκου και στην ανάπτυξη ΚΥΜ, τα κύτταρα αυτά ενέθηκαν υποδόρια και ενδοϋπεζωκοτικά σε αντίστοιχους ποντικούς. Παρατηρήθηκε ενεργοποίηση των υπομονάδων του κανονικού και κυρίως του εναλλακτικού μονοπατιού, καθώς επίσης και των κινασών του NF-κB στο ΚΥΜ. Οι δύο υπό μελέτη κινάσες αποδεικνύονται σημαντικές στη λειτουργία των κυτταρικών σειρών ΚΥΜ, με την IKKα να διαδραματίζει σημαντικότερο ρόλο. Απαραίτητη φαίνεται η δράση τους τόσο στην ανάπτυξη του πρωτοπαθούς όγκου όσο και στην δημιουργία και εξέλιξη του ΚΥΜ. Το γεγονός αυτό καθιστά τις κινάσες πιθανούς θεραπευτικούς στόχους.
