RKIP has been shown to regulate the RAS-RAF-MEK-ERK kinase cascade acting
as modulator of apoptosis and metastasis in prostate cancer. Our goal was to
examine the expression of the RAF (A-RAF, B-RAF and RAF-1) and RKIP genes
in urinary bladder cancer. Microarray analysis and qPCR was employed to
investigate the expression of RAF and RKIP, in 30 patients with transitional cell
carcinoma (TCC) of the urinary bladder vs. the corresponding levels of adjacent
normal tissue. Computational analysis was also performed on Gene Expression
Omnibus (GEO) datasets, to unravel differences in the expression of RAF or
RKIP between tumor and control samples, and between superficial and muscle
invasive tumors. Microarray analysis revealed >2-fold expression of BRAF and
RKIP in T2, T3, grade III tumors vs. controls. B-RAF over-expression was
verified by qPCR in pT1, grade III tumors vs. their normal counterparts
(p=0.016). qPCR revealed a significant RKIP reduction in TCC vs. normal tissue
(p=0.002 and p<0.001 for T1, grade II and Ta-T1, grade III, respectively); All
RAF genes were positively correlated among each other (A-RAF/B-RAF,
p=0.003; A-RAF/RAF-1, p<0.001; B-RAF/RAF-1, p=0.050), whereas B-RAF
was negatively correlated with RKIP in TCC (p=0.050). Further computational
analysis revealed different expression profiles for the genes of interest, among
muscle invasive carcinomas, superficial TCCs, cystectomy specimens and normal
tissue. The reduced RKIP mRNA levels in TCC and the elevated levels of B-RAF
in pT1, grade III tumors vs. normal tissue, corroborate that these genes are
involved in the pathogenesis of urinary bladder cancer.
Το RKIP έχει δειχθεί ότι ρυθμίζει τον καταρράκτη φωσφορυλίωσης της ΜΑΡΡ
κινάσης, RAS-RAF-MEK-ERK, δρώντας ως διαμορφωτής της απόπτωσης και
της μετάστασης στον καρκίνο του προστάτη. Σκοπός της παρούσας διδακτορικής
διατριβής είναι η μελέτη της έκφρασης των γονιδίων RAF (A-RAF, B-RAF και
C-RAF ή RAF-1) και RKIP σε ασθενείς με ουροθηλιακό καρκίνο ουροδόχου
κύστεως. Για την παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκαν δείγματα από 30 ασθενείς
με καρκίνο μεταβατικού επιθηλίου ουροδόχου κύστεως (TCC) σε σύγκριση με 30
δείγματα από τον παρακείμενο φυσιολογικό ιστό, όπου και μελετήθηκαν με τη
μέθοδο της Microarray ανάλυσης και της qPCR που πραγματοποιήθηκε με σκοπό
την ανίχνευση των επιπέδων έκφρασης των γονιδίων RAF και RKIP στα δείγματα
αυτά. Επίσης πραγματοποιήθηκε Computational ανάλυση με τα πακέτα
δεδομένων Gene Expression Omnibus (GEO) datasets, με σκοπό να
διαλευκανθούν οι διαφορές της έκφρασης των RAF ή RKIP γονιδίων μεταξύ των
καρκινικών δειγμάτων και των controls καθώς επίσης και μεταξύ των
επιφανειακών όγκων και των μυοδιηθητικών όγκων. Τα αποτελέσματα από τη
Microarray ανάλυση αποκάλυψαν υπερέκφραση (>2-fold), της έκφρασης των
γονιδίων BRAF και RKIP σε όγκους T2, T3, grade III σε σύγκριση με τα controls.
Η υπερέκφραση του B-RAF επαληθεύτηκε περαιτέρω με τη μέθοδο της qPCR σε
όγκους pT1, grade III σε σχέση με τα αντίστοιχα φυσιολογικά δείγματα
(p=0.016). Με την qPCR παρατηρήθηκε σημαντική μείωση της έκφρασης του
RKIP στα δείγματα TCC σε σχέση με αυτά του φυσιολογικού ιστού (p=0.002 και
p<0.001 για όγκους T1, grade II και Ta-T1, grade III, αντίστοιχα). Όσον αφορά
τις συσχετίσεις μεταξύ των γονιδίων RAF και RKIP, όλα τα RAF γονίδια
παρουσίασαν θετικές συσχετίσεις μεταξύ τους (A-RAF/B-RAF με p=0.003, ARAF/
RAF-1με p<0.001, B-RAF/RAF-1με p=0.050), ενώ το B-RAF παρουσίασε
αρνητική συσχέτιση με το RKIP στα δείγματα TCC (p=0.050). Ωστόσο με την
πραγματοποίηση της Computational ανάλυσης παρατηρήθηκαν τα διαφορετικά
εκφραστικά προφίλ των γονιδίων του ενδιαφέροντος μεταξύ, μυοδιηθητικών
όγκων, επιφανειακών όγκων του ουροθηλίου της ουροδόχου κύστεως, δειγμάτων
κυστεκτομής και φυσιολογικού ιστού. Συνοπτικά λοιπόν, η μείωση των επιπέδων
έκφρασης του RKIP mRNA σε καρκινικά δείγματα μεταβατικού επιθηλίου
ουροδόχου κύστης και τα αυξημένα επίπεδα του B-RAF mRNA σε όγκους pT1,
grade III σε σχέση με αυτά του φυσιολογικού ιστού παρέχουν ενδεικτικά στοιχεία
ότι αυτά τα γονίδια εμπλέκονται στην παθογένεια του ουροθηλιακού καρκίνου
της ουροδόχου κύστης
National Documentation Centre (EKT)
