Βιβλιογραφία : σ. 52-55
Η παρούσα πτυχιακή εργασία είχε σκοπό την αξιολόγηση μιας πιθανής συσχέτισης μεταξύ των επιπέδων συγκέντρωσης του κυκλοφορούν ελεύθερο κυττάρων DNA (cell-free DNA, cfDNA) σε δείγματα βιολογικών υγρών, όπως αίμα και αρθρικό υγρό, με την κλινική εικόνα ατόμων που πάσχουν από οστεοαρθρίτιδα προκειμένου να μπορέσει διερευνηθεί η δυνατότητα χρήσης αυτής της πληροφορίας ως προγνωστική μέθοδο ή ακόμα και ως μέσο πρόβλεψης της έκβασης της ασθένειας από τα αρχικά στάδια της. Η οστεοαρθρίτιδα αποτελεί την συχνότερη χρόνια αρθροπάθεια, η οποία επηρεάζει όλες τις αρθρώσεις άλλα εμφανίζεται κυρίως στο γόνατο, ισχίο, κάτω μέρος πλάτης και λαιμό, στους μικρούς συνδέσμους των δαχτύλων και στην βάση του αντίχειρα και του μεγάλου δαχτύλου του ποδιού. Επιπλέον, έχει παρατηρηθεί σχετική αύξηση των επιπέδων cell-free DNA στην κυκλοφορία ατόμων τα οποία έχουν διαγνωστεί με διάφορες παθολογικές καταστάσεις, στις οποίες έχουμε εκτενή κυτταρικό θάνατο, (απόπτωση/νέκρωση κυττάρων αίματος ή ιστών) κάτι το οποίο δεν συμβαίνει σε υγιή άτομα.
Στη μελέτη αυτή εξετάστηκαν ασθενείς που έπασχαν από οστεοαρθρίτιδα γονάτου από τους οποίους συλλέχτηκαν δείγματα ορού αίματος και αρθρικού υγρού για απομόνωση cell-free DNA. Στην συνέχεια, για να πραγματοποιηθεί η ανίχνευση συγκέντρωσης cfDNA στο αρθρικό υγρό ασθενών για συσχέτιση με τα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά τους καθώς για συγκριτική μελέτη των διάφορων συγκεντρώσεων ανάμεσα σε ορό και αρθρικό υγρό ακολούθησε απομόνωση του cfDNA και ποσοτικοποίηση με τις μεθόδους της ποσοτικής PCR (quantitative PCR, qPCR) και της φασματομετρίας φθορισμού (δοκιμασία Qubit). Έπειτα τα αποτελέσματα ελέγχθηκαν, αρχικά, για την ύπαρξη ανιχνεύσιμης ποσότητας cfDNA στο αρθρικό υγρό και μετέπειτα συσχέτιση τους με το ιατρικό ιστορικό των ασθενών. Οι συγκεντρώσεις cfDNA σε ορό και αρθρικό υγρό του ίδιου ασθενή συγκρίθηκαν περαιτέρω για εξακρίβωση στατιστικά σημαντικής αλληλεξάρτησης των επιπέδων cfDNA ανάμεσα στα δυο βιολογικά υγρά. Από την στατιστική ανάλυση των παραπάνω σχέσεων βρέθηκε ότι ακόμα και αν τα αποτελέσματα ήταν στατιστικά μη σημαντικά, λόγω του περιορισμένου αριθμού παρατηρήσεων, υπήρξε η ένδειξη κάποιας πιθανής συμφωνίας των επιπέδων του cfDNA με την αύξηση της ηλικίας καθώς και του δείκτη μάζας σώματος των ασθενών.
55 σ.
The current project aims at assessing a possible correlation between cell-free DNA (cfDNA) concentration levels in samples of biological fluids such as blood and synovial fluid in people suffering from osteoarthritis to investigate the possibility of using this information as a prognostic method or even as a means to predict the outcome of the disease from its early stages. Osteoarthritis is the most common chronic arthropathy, which affects all joints but occurs mainly in the knee, hip, lower back and neck, small finger joints and the base of the thumb and big toe. In addition, there has been examined a relative increase in cell-free DNA levels in the circulation of individuals, diagnosed with various pathological conditions in which we have extensive cell death (apoptosis / necrosis of blood cells or tissues) which is not the case in healthy individuals.
This study studied patients suffering from knee osteoarthritis, from which serum and synovial fluid samples were collected, to isolate cell-free DNA. Then, to compare the various concentrations, quantitation was performed using quantitative Real-time PCR (RT-qPCR) and Qubit Fluorescent methods. Results were then initially tested for the correlation between cfDNA in synovial fluid and the clinical-pathological characteristics of the patients and therefore further examination of the connection between the levels of cfDNA in synovial fluid and serum. From the statistical analysis of the above relationships it was found that although the results were statistically insignificant, due to a limited number of observations there was an indication of the possible agreement of the cfDNA levels with the age and the body mass index of the patients.
Δημοκρίτειο Πανεπιστήμιο Θράκης
