Το τεκμήριο παρέχεται από τον φορέα :
Πανεπιστήμιο Κρήτης
Αποθετήριο :
E-Locus Ιδρυματικό Καταθετήριο
δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου
στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*
κοινοποιήστε το τεκμήριο



Μελέτη του γονιδίου ΤΕΤ2 σε ασθενείς με Χρόνια Ιδιοπαθή Ουδετεροπενία
Study of TET2 gene in Chronic Idiopathic Neutropenia Patients

Σημαντηράκης, Εμμανουήλ

Ποντίκογλου, Χαρίλαος
Παπαδάκη Ελένη
Καστρινάκη Χριστίνα

Εισαγωγή: Οι μεταλλαγές στο γονίδιο Τet2 είναι συχνές στα μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα , την οξεία μυελογενή λευχαιμία και την χρόνια μυελομονοκυτταρική λευχαιμία. Το Tet2 είναι ένα σημαντικό ένζυμο που καταλύει τη μετατροπή της 5-μέθυλοκυτοσίνης σε 5-υδροξυμέθυλοκυτοσίνη. Η 5-υδροξυμέθυλοκυτοσίνη δρα ως σήμα απομεθυλίωσης και το Tet2 αναδείχθηκε ως ένα σημαντικό ογκογονίδιο στους αιματολογικούς καρκίνους τα τελευταία χρόνια. Η απώλεια του Τet2 οδηγεί τα αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα που ανήκουν στο διαμέρισμα LSK να αυξήσουν την βλαστικότητά τους και ευνοούν την διαφοροποίηση των μονοπυρινικών/κοκκιοκυτταρικών προγονικών κυττάρων προς την μονοκυτταρική σειρά, εις βάρος της κοκκιώδους σειράς. Στόχος: Σε κάποια πρώιμα πειράματα αλληλούχισης σε δείγματα DNA 7 ασθενών με Χρόνια Ιδιοπαθή Ουδετροπενία βρήκαμε τον πολυμορφισμό μονού νουκλεοτιδίου (SNP) rs62621450 σε συχνότητα 7%, στους ασθενείς της Κρήτης, σε σχέση με την αναφερόμενη στην βιβλιογραφία (5%). Θελήσαμε να αξιολογήσουμε τον πολυμορφισμό αυτόν ως βιολογικό μάρτυρα της Χρόνιας Ιδιοπαθούς Ουδετεροπενίας. Επίσης θελήσαμε να μετρήσουμε τα επίπεδα έκφρασης του mRNA του Tet2 σε λευκομονοπύρηνα και κοκκιοκύτταρα και να αξιολογίσουμε εάν η ουδετεροπενία μπορεί να οφείλεται στην μικρότερη έκφραση του mRNA του Tet2. Μέθοδοι: Εκτίμηση του πολυμορφισμού του Τet2 rs62621450 στους ασθενείς με CIN: 42 ασθενείς με Χρόνια Ιδιοπαθή ουδετεροπενία και 30 υγιής μάρτυρες έλαβαν μέρος σε αυτήν την κοωρτή. Ελήφθησαν δείγματα περιφερικού αίματος και απομονώθηκαν κοκκιοκύτταρα. Από τα τελευταία απομονώθηκε DNA. Για την ανίχνευση του γονότυπου των ατόμων χρησιμοποιήθηκε το κιτ γονοτύπισης TaqMan Genotyping Kit. Εκτίμηση των επιπέδων του mRNA του Tet2: Λευκομονοπύρηνα και κοκκιοκύτταρα/ουδετερόφιλα απομονώθηκαν από δείγματα περιφερικού αίματος από 16 ασθενείς και 16 υγιής μάρτυρες και απομονώθηκε το ολικό RNA τους. Έγινε αντίστροφη μεταγραφή και στη συνέχεια τα επίπεδα του mRNA του Tet2 μετρήθηκαν με την μέθοδο της Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (real time PCR). Οι τιμές κανονικοποιήθηκαν ως προς το γονίδιο οικιακής οικονομίας GAPDH και τα επίπεδα έκφρασης ποσοτικοποιήθηκαν ως τιμή 2^-DCt. Αποτελέσματα: 1 από τους 42 ασθενείς ήταν ετερόζυγοι ως προς το αγρίου τύπου αλληλόμορφο και τον πολυμορφισμό (1,2%), ενώ 3 από τους 30 υγιής μάρτυρες ήταν ετερόζυγοι για τον πολυμορφισμό (5%) (σύμφωνα με το Fisher’s exact test P=0.3). Αυτό σημαίνει ότι η συχνότητα του πολυμορφισμού δεν διαφέρει μεταξύ της κοωρτής μας και της αναφερόμενης από την βιβλιογραφία. Τα επίπεδα του mRNA του Tet2 και για τις 3 ισομορφές είναι κατά 0.5 φορές αυξημένα στα λευκομονοπύρηνα των ασθενών με (P=0.0094), την ίδια τάση φαίνεται να έχουν και τα κοκκιοκύτταρα των ασθενών (P=0.7). Συμπεράσματα: Στην κοωρτή μας, η Χρόνια Ιδιοπαθής Ουδετεροπενία δεν φαίνεται να σχετίζεται με τον πολυμορφισμό του Tet2 rs62621450. Παρόλα αυτά φαίνεται να υπάρχει μια μέτρια μεν, σημαντική δε αύξηση των επιπέδων του mRNA του Tet2 στα λευκομονοπύρηνα των ασθενών σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες. Μπορεί να παρατηρούμε αυτό το φαινόμενο ως αποτέλεσμα ενός αντισταθμιστικού μηχανισμού στην απώλεια των ουδετεροφίλων στην περιφερικό αίμα των ασθενών, μέσω κάποιου είδους σηματοδότηση μέσω έκκρισης ή απελευθέρωσης κάποιου διαλυτού παράγοντα/μορίου μπορεί να λαμβάνει χώρα. Η 29 τελευταία αυξάνει την έκφραση του Tet2 στα προγονικά κύτταρα της μυελικής και κοκκιοκυτταρικής σειράς για να προωθήσει την επιβίωσή τους και την διαφοροποίησή τους προς την κοκκιοκυτταρική/μονοκυτταρική σειρά. (EL)
Background: Mutations on Tet2 gene are common in MDS, AML and CMLL. Tet2 is an important enzyme that converts 5-methylcytosine into 5-hydroxymethylcytosine. 5-hydroxy-methylcytosine acts as a demethylation signal and Tet2 has emerged as an oncogene in the recent years. Inhibition of Tet2 gene leads to increased self-renewal of the HSC LSK compartment, promoting the differentiation of monocyte/granulocyte progenitors to monocytes in expense of the granulocytic development/differentiation. Aim: Based on our preliminary experiments on 7 patients, we found Tet2 SNP rs62621450 with increased frequency in Cretan CIN patients (7%) slightly more frequent, than that reported in the literature. Aim of this study is to investigate whether rs62621450 is a possible biomarker for CIN patients, by evaluating its existence in a larger group of patients, and by evaluating Tet2 mRNA levels in CIN and normal PBMCs and granulocytes in order to correlate the observed neutrophil depletion with a possible Tet2 gene downregulation. Methods: Identification of rs62621450: Peripheral blood granulocytes were isolated from 42 CIN patients and 30 normal subjects and DNA was isolated. The TaqMan Genotyping kit was used to identify the polymorphism. Evaluation of Tet2 mRNA levels: PBMCs and granulocytes were isolated from 16 patients and 16 normal subjects. Total RNA was isolated, reverse transcription performed and Tet2 mRNA levels were measured by the use of real-time PCR. The values were normalized versus GAPDH housekeeping gene and expression level were expressed as 2^-ΔCt values. Results: 1/42 CIN patients was heterozygous for rs62621450 (frequency 1.2%), while 3/30 healthy subjects were heterozygotes for the SNP (5%). Frequencies in our cohort study do not differ from the reported SNP frequency in literature (5%), as defined by Fisher’s exact Test (P= 0.3). Moreover, we found that Tet2 mRNA levels were significantly increased in patient PBMCs (P=0.0094), and in patient neutrophils (P=0.7), compared to controls. Summary/Conclusions: In our cohort study, Tet2 SNP rs6262145 does not correlate with CIN. Nevertheless a moderate but significant increase in Tet2 mRNA levels was observed in patient PBMCs compared to healthy subjects. This might result as a compensatory mechanism to neutrophil loss in patient blood, where secreted signaling may act upon progenitor cells to increase Tet2 expression, hence promoting their survival/differentiation towards granulocytes. (EN)

text

ΤΕΤ2
Χρόνια Ιδιοπαθής Ουδετεροπενία
Μυελοδυσπλασία
Myelodysplastic syndromes
Neutropenia

Πανεπιστήμιο Κρήτης (EL)
University of Crete (EN)

2012-12-11




*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.