δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*
Η κινάση Chk1 προστατεύει από τις χρωματινικές γέφυρες φωσφορυλιώνοντας την πρωτεΐνη BLM στη Σερίνη 502 και εμποδίζοντας την αποικοδόμηση της
Chk1 protects against chromatin bridges by constitutively phosphorylating BLM Serine 502 to inhibit BLM degradation
Οι γέφυρες DNA αποτελούν μη σωστά διαχωρισμένο χρωμοσωμικό DNA που συνδέει τους πόλους των δύο θυγατρικών κυττάρων, κατά την ανάφαση της μίτωσης. Αν δεν επιλυθούν, είναι δυνατόν να σπάσουν κατά την κυτταροκίνηση οδηγώντας σε χρωμοσωμική αστάθεια. Η ελικάση BLM εντοπίζεται στις γέφυρες DNA και είναι απαραίτητη για την επίλυση τους.
Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι αναστολή της κινάσης Chk1 οδηγεί σε αποικοδόμηση της BLM από το πρωτεάσωμα στη μεσόφαση, και σε αύξηση των γεφυρών χρωματίνης στην ανάφαση. Η Chk1 φωσφωρυλιώνει συνεχώς την BLM στη Σερίνη 502 in vivo και η φωσφορυλιωμένη BLM εντοπίζεται στις γέφυρες DNA στην ανάφαση. Κύτταρα που εκφράζουν την πρωτεΐνη BLM στην οποία η Σερίνη 502 έχει μεταλλαχθεί σε ασπαραγινικό οξύ, ώστε να μιμείται τη φωσφορυλιωμένη BLM στη Σερίνη 502 (S502D BLM), εμφανίζουν σταθερά επίπεδα της BLM και προστασία έναντι των χρωματινικών γεφυρών, όταν αναστέλλουμε την Chk1. Επίσης, η Cullin 3 λιγάση ουβικυτίνης αλληλεπιδρά μόνο με την αγρίου τύπου πρωτεΐνη και όχι με την μεταλλαγμένη S502D BLM, ενώ με μείωση της Cullin 3 τα επίπεδα της BLM δεν ελαττώνονται και η πρωτεΐνη εντοπίζεται στις γέφυρες χρωματίνης έπειτα από αναστολή της Chk1.
Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η κινάση Chk1 φωσφορυλιώνει τη πρωτεΐνη BLM στη Σερίνη 502, εμποδίζει την πρόσδεση της Cullin 3 στη BLM και την αποικοδόμηση της από το πρωτεάσωμα. Προτείνουμε λοιπόν, ότι η Chk1 προστατεύει από τις γέφυρες DNA στην ανάφαση μέσω σταθεροποίησης της BLM πρωτεΐνης.
(EL)
DNA bridges represent incompletely segregated chromosomal DNA, connecting the poles of the two daughter cells during anaphase. If unresolved, DNA bridges can be fragmented during cytokinesis leading to chromosomal instability. Bloom’s syndrome protein, BLM, is localized in anaphase bridges and this localization is required for their resolution.
Here, we show that Chk1 inhibition leads to BLM proteosomal degradation during interphase and higher frequency of chromatin bridges in anaphase. Chk1 constitutively phosphorylates BLM at Serine 502 (S502) in vivo and phosphorylated BLM localises to chromatin bridges. Mutation of Serine 502 of BLM to a phospho-mimicking BLM-S502D, in which S502 is mutated to aspartic acid, stabilises BLM and prevents chromatin bridges in Chk1 deficient cells. In addition, Cullin 3 ubiquitin ligase associates with wild-type but not BLM-S502D and Cullin 3 depletion stabilises BLM and rescues BLM localisation to chromatin bridges after Chk1 inhibition.
These results suggest that Chk1 phosphorylates BLM at Serine 502 to inhibit Cullin 3-mediated BLM degradation by proteasome during interphase. We propose that Chk1 prevents DNA bridges in anaphase by stabilising BLM.
(EN)
*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.
Βοηθείστε μας να κάνουμε καλύτερο το OpenArchives.gr.
Πανεπιστήμιο Κρήτης
