Αντικείμενο της έρευνας ήταν η μελέτη και εντοπισμός τυχόν διαφορών στην μικροχλωρίδα σε διαφορετικά στελέχη του δάκου της ελιάς: εργαστηριακής αποικίας, διαγονιδιακού, φυσικοί πληθυσμοί διαφόρων οικοτόπων, ποικιλιών ελιάς, εποχών έτους. Στόχος ο εντοπισμός τυχόν δραστικών αλλαγών στη μικροχλωρίδα του εντόμου. Από τα παραπάνω στελέχη απομονώθηκαν βακτήρια, τα οποία αναπτύχθηκαν σε θρεπτικό μέσο L.B. (Luria- Broth). Στη συνέχεια έγινε επανακαλλιέργεια των αποικιών στο ίδιο θρεπτικό έτσι ώστε να έχουμε μοναδικές αποικίες από το κάθε στέλεχος για κάθε διαφορετική αποικία που μπορούσαμε να διακρίνουμε τουλάχιστον μακροσκοπικά (2-4 σε κάθε στέλεχος), και ταυτόχρονα έγινε παρατήρηση και περιγραφή των αποικιών και η stock καλλιέργεια τους σε υγρό θρεπτικό με τη χρήση γλυκερόλης. Στη συνέχεια με την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR- PCR colony) στην οποία χρησιμοποιήσαμε σπασμένα κύτταρα βακτηρίων, πολλαπλασιάσαμε το DNA των βακτηρίων που είχαμε απομονώσει, με τη χρήση εκκινητών (primers) και ενζύμων κατάλληλων για τον πολλαπλασιασμό βακτηριακού DNA. Μετά από ηλεκτροφόρηση των προϊόντων της παραπάνω αντίδρασης σε gel αγαρόζης για να διαχωρίσουμε τα μόρια DNA με βάση το μήκος τους, καθαρίσαμε το προϊόν της αντίδρασης (PEG precipitation of PCR product) και κάναμε την ποσοτικοποίησή του και τα δείγματά ήταν έτοιμα για αλληλούχιση (sequencing) του DNA τους.
(EL)
The microorganisms associated with different strains of the olive fruit fly were examined, in case to find differences of the microflora among wild and laboratory populations. Bacteria were isolated from pupae of different climatic locations, olive fruit cultivars, and seasons of the year, as well as that of laboratory strains. Pupae were homogenized and cultivated in Luria-Broth medium, after external sterilization. Single bacterial colonies were examined macroscopically and different patterns were obtained from each strain. The molecular analysis (DNA extraction and 16S rRNA gene amplification) shown that several different bacterial species and fungi were isolated and differences appeared to exist, among others, between laboratory and wild strains from different olive cultivars and seasons of the year
(EN)
University of Crete
