Η παρούσα διατριβή περιλαμβάνει εισαγωγή πάνω στη γενωμική οργάνωση της χρωμοσωμικής περιοχής 5Q23-31, κεφάλαια με τη μαθοδολογία, τα αποτελέσματα και την συζήτηση. Σε αυτή την περιοχή εδράζονται ένας εντυπωσιακός αριθμός ανθρώπινων γονιδίων, τα οποία κωδικοποιούν για αυξητικούς παράγοντες και ρυθμιστικά μόρια, τα οποία ρυθμίζουν την αιμοποίηση. Η περιοχή αυτή και ειδικότερα η περιοχή προς το 3 του γονιδίου GM-CSF, θεωρείται υπεύθυνη για την εκδήλωση ενός μυελοδυσπλαστικού συνδρόμου, το οποίο εξελίσσεται σε λευχαιμία, το 5Q-. Στόχος της μελέτης ήταν η φυσική χαρτογράφηση της περιοχής 5Q23-31, η εύρεση νέων γονιδίων και η μελέτη της χρωμοσωμικής εντόπισής τους, της δομής και λειτουργίας τους. Η ανίχνευση yac κλώνων από τις βιβλιοθήκες Washinghton, ICRF και CEPH yac με χρήση IL3 και GM-CSF ανιχνευτών οδήγησε στην κατασκευή ενός φυσικού χάρτη της περιοχής με τη μελέτη των yacs που καλύπτει την περιοχή 5Q23-31 και γειτνιάζει με το εγγύς σημείο της αποκοπής του ελλείματος. Με τη μεθοδολογία της άμεσης επιλογής CDNA μυελού οστών, ανιχνεύθηκαν δυο κλώνοι (Δ και Μ)μεταξύ άλλων από τη χρωμοσωμική περιοχή 5Q31. Στην παρούσα μελέτη επιχειρήθηκε η χρωμοσωμική εντόπιση των δυο γονιδίων στη περιοχή 5Q31 και γι' αυτό απομονώθηκαν 36 κοσμιδιακοί κλώνοι από ανθρώπινη γενωμική κοσμιδιακή βιβλιοθήκη μα τη χρήση των Μ και GM-CSF ως ανιχνευτών. Η λεπτομερής χαρτογράφηση των κλώνων έδειξε ότι τα γονίδια Δ και Μ εδράζονται 3.7 kb και 13 kb απο το 3 άκρο του GM-CSF αντίστοιχα.
(EL)
The present study includes an introduction to thr genomic organization of the human chromosomal region 5Q23-31, chapter with methodology, the results and the discussion. A number of genes that code for hemopoietic growth factors, receptors, or other regulatory molecules, have been assigned to the chromosomal region 5Q23-32. Aquired loss of the region 5Q23-31 has been assosiated with the hemopoietic disorder known as 5Q-syndrome. The purpose of this study is the physical characterisation of the chromosomal region 5Q23-31 and the isolation of novel genes which will be studied further in order to assign these genes on the human genome and to study their structure and function. Molecular characterization of this chromosomal domain were started by screening of 3 human yac libraries using IL3 and GM-CSF as probes. Nine yac clones were isolated and were subsequently been used in order to construct a conting in a region that includes the IL3, IRF1 and GM-CSF genes. DNA molecules from these yacs has been used as probes. One of these yacs has been used as template for the selection of CDNA clones from a bone-marrow CDNA library. Two of the selected CDNA clones have been chosen for further analysis.Northern blot analysis showed that delta gene was expresses in the spleen, peripheral blood cells and embryonal liver giving 1.0 kd transcript. The other clone M was expressed in brain, placental, small intestine, colon, lung, kidney, liver, sceletal muscle, pancreas and test is giving 1.2 and 1.3 kb transcript.(Abstract truncated)
(EN)
University of Crete
