δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*
Ανάπτυξη ανοσοαισθητήρα πλευρικής ροής για την ταχεία ποσοτικοποίηση του καρκινοεμβρυϊκού αντιγόνου στον ανθρώπινο ορό
Σε αυτή τη μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία αναπτύχθηκε ένας ανοσοαισθητήρας
πλευρικής ροής (lateral flow immunoassay ή LFIA) για την γρήγορη και επί-τόπου (on-site) ανίχνευση και ποσοτικοποίηση του καρκινοεμβρυικού αντιγόνου (CEA) σε
ανθρώπινο ορό αίματος. Η ανίχνευση του CEA έγινε με χρήση μεμβράνης
νιτροκυτταρίνης και τα σήματα διαβάστηκαν, επεξεργάστηκαν και μετρήθηκαν με το
πρόγραμμα Inkscape. Χρησιμοποιήθηκαν νανοσωματίδια χρυσού (GNPs) συζευγμένα
με αντίσωμα ανίχνευσης ειδικό για το CEA. Η ανίχνευση βασίστηκε σε μια
ανοσοαντίδραση τύπου sandwich μεταξύ των συζευγμένων με νανοσωματίδια χρυσού
αντισωμάτων ως προς CEA, του CEA και ενός διαφορετικού αντισώματος
ακινητοποιημένου στην γραμμή δοκιμής (test line). Τα strips σε βελτιστοποιημένες
συνθήκες έδωσαν σήμα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση CEA με γραμμική περιοχή
από 1,25 ng/ml έως 640ng/ml σε λογαριθμική καμπύλη. Ο ανεπτυγμένος
ανοσοαισθητήρας ήταν αρκετά ευαίσθητος με όριο ανίχνευσης με γυμνό οφθαλμό τα
0,625 ng/ml χωρίς χρήση κάποιας τεχνικής ενίσχυσης σήματος και ο χρόνος
προσδιορισμού ήταν τα 30 λεπτά. Η ειδικότητα ως προς άλλους πρωτεϊνικούς
βιοδείκτες ήταν καλή. Η ανάκτηση κυμαίνονταν στο 81-118% και η σχετική τυπική
απόκλιση της μεθόδου ήταν ≤10%. Πέντε δείγματα ανθρώπινου ορού που περιείχαν
CEA ελέγχθηκαν με την μέθοδο RIA και τον αναπτυγμένο ανοσοαισθητήρα,
παρουσιάζοντας εξαιρετική συσχέτιση (R=0,99). Αυτή η συσκευή μπορεί δυνητικά να
χρησιμοποιηθεί για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας σε
ασθενείς με καρκίνο, ιδιαίτερα σε απομονωμένες τοποθεσίες μακριά από εργαστηριακές
εγκαταστάσεις.
(EL)
In this thesis we developed a lateral flow immunosensor for the rapid, on-site detection
and quantification of carcinoembryonic antigen (CEA) in human blood serum. CEA
sensing was performed using nitrocellulose-based lateral flow strips and the signals
were read, processed and measured via the program Inkscape. The sensing was based
on a sandwich immunoreaction of the gold nanoparticle-labeled anti-CEA antibody, the
CEA molecule and a different anti-CEA antibody immobilized on the test line. Such
lateral flow strips used in optimal conditions, showed signals which were dependent on
CEA concentrations in a linear range from 1,25 to 640 ng/ml in a logarithmic plot. The
novel immunosensor was highly sensitive with a visual limit of detection of 0,625 ng/ml
without any form of signal amplification and an assay time of 30 min. The specificity of
the immunoassay versus other biomarkers was satisfactory. The recovery was in the
range of 81-118% and the coefficient of variation of the method was ≤10%. Five
samples of human serum containing CEA were also tested using the immunosensor
and compared with the RIA method, demonstrating an excellent correlation (R=0,99).
This LFA can potentially be utilized for the point-of-care testing and monitoring of cancer
treatment, particularly at locations far from centralized laboratory facilities.
(EN)
*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.
Βοηθείστε μας να κάνουμε καλύτερο το OpenArchives.gr.
Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Αθηνών
