ΑΥΞΗΣΗ IN VITRO, ΤΗΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗΣ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ (ΕΙΤΕ ΑΜΕΣΑ, ΕΙΤΕ ΕΜΜΕΣΑ ΜΕ ΤΗΝ ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΣΥΝΔΙΑΛΥΤΩΝ) ΕΥΝΟΕΙ ΤΟ ΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ ΤΗΣ ΤΕΤΡΑΜΕΡΟΥΣ ΜΟΡΦΗΣ ΤΗΣ PEP-ΚΑΡΒΟΞΥΛΑΣΗΣ (PEPCASE, E.C. 4.1.1.31), ΕΝΩ ΤΑΥΤΟΧΡΟΝΑ ΠΡΟΣΕΓΓΙΖΕΤΑΙ ΚΑΛΥΤΕΡΑ Η IN VIVΟ ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ, ΟΠΟΥ Η ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΕΙΝΑΙ ΕΞΑΙΡΕΤΙΚΑ ΥΨΗΛΗ. ΣΤΗΝ ΕΝΕΡΓΟ ΜΟΡΦΗ ΤΟΥ ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΑΝΑΜΕΝΕΤΑΙ ΟΤΙ ΑΠΟΚΤΑ ΤΗΝ ΚΑΛΥΤΕΡΗ ΔΙΑΜΟΡΦΩΣΗ, ΩΣΤΕ ΝΑ ΔΙΕΥΚΟΛΥΝΕΤΑΙ Η ΔΕΣΜΕΥΣΗ ΤΟΥ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ. ΕΠΟΜΕΝΩΣ, ΤΑ ΑΜΙΝΟΞΕΑ ΤΟΥ ΕΝΕΡΓΟΥ ΚΕΝΤΡΟΥ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΕΙΝΑΙ ΠΙΟ ΕΥΚΟΛΑ ΠΡΟΣΕΓΓΙΣΙΜΑ ΑΠΟ ΤΟ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΚΑΙ ΑΡΑ ΚΑΙ ΑΠΟ ΕΙΔΙΚΟΥΣ ΠΡΟΣ ΑΥΤΑ ΧΗΜΙΚΟΥΣ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΤΕΣ. ΕΞΕΤΑΣΘΗΚΕΗ ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗΣ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΑΠΟ ΦΥΛΛΑ ΤΟΥ CYNODON DACTYLON (L.) PERS. ΣΤΗ ΔΡΑΣΗ ΧΗΜΙΚΩΝ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΤΩΝ ΠΟΥ ΠΡΟΣΒΑΛΛΟΥΝ ΟΜΑΔΕΣ ΚΥΣΤΕΙΝΗΣ, ΑΡΓΙΝΙΝΗΣ, ΙΣΤΙΔΙΝΗΣ ΚΑΙ ΛΥΣΙΝΗΣ, ΟΙ ΟΠΟΙΕΣ ΘΕΩΡΟΥΝΤΑΙ ΟΤΙ ΣΥΜΜΕΤΕΧΟΥΝ ΣΤΗ ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΤΟΥ ΕΝΕΡΓΟΥ ΚΕΝΤΡΟΥ ΤΗΣ PEPCASE. ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΟΤΙ Η ΑΝΑΣΤΑΛΤΙΚΗΔΡΑΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΠΟΥ ΤΡΟΠΟΠΟΙΟΥΝ ΤΙΣ ΟΜΑΔΕΣ ΚΥΣΤΕΙΝΗΣ ΜΕΙΩΝΕΤΑΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΑ, ΟΤΑΝ ΑΥΞΑΝΕΤΑΙ ΑΜΕΣΑ Η ΕΜΜΕΣΑ (ΜΕ ΤΗΝ ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΣΥΝΔΙΑΛΥΤΩΝ) Η ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ. ΑΝΤΙΘΕΤΑ, Η ΑΝΑΣΤΑΛΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ ΧΗΜΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΠΟΥ ΤΡΟΠΟΠΟΙΟΥΝ ΤΙΣ ΟΜΑΔΕΣ ΑΡΓΙΝΙΝΗΣ, ΙΣΤΙΔΙΝΗΣ ΚΑΙ ΛΥΣΙΝΗΣ ΑΥΞΑΝΕΤΑΙ ΜΕ ΤΗΝ ΑΜΕΣΗ ΑΥΞΗΣΗ ΤΗΣ ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗΣ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ, ΕΝΩ Η ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΣΥΝΔΙΑΛΥΤΩΝ ΕΧΕΙ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΗ ΕΠΙΔΡΑΣΗ (ΠΡΟΣΤΑΤΕΥΤΙΚΗ Η ΟΥΔΕΤΕΡΗ). ΑΥΤΗ Η ΑΝΑΝΤΙΣΤΟΙΧΙΑ ΠΙΘΑΝΩΣΝΑ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΕ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΗ ΚΑΤΑΝΟΜΗ ΤΩΝ ΧΗΜΙΚΩΝ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΤΩΝ (ΣΕ ΣΧΕΣΗ ΜΕ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ) ΣΤΙΣ ΜΙΚΡΟΦΑΣΕΙΣ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΝΕΡΟ-ΣΥΝΔΙΑΛΥΤΗΣ-ΠΡΩΤΕΙΝΗ. (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ).
THE COMPOSITION OF PEPCASE'S ACTIVE CENTER WAS STUDIED UNDER A NOVEL APPROACH.IN ITS TETRAMERIC FORM THE ENZYME IS EXPECTED TO GAIN THE MOST EFFECTIVE CONFORMATION FOR SUBSTRATE BINDING AND CATALYSIS OF THE REACTION; CONSEQUENTLY THE AMINO ACIDS RESIDUES OF THE ACTIVE CENTER MUST BE MORE ACCESIBLE TO THE SUBSTRATE AND SIMILARLY, TO CHEMICAL MODIFIERS SPECIFIC FOR THESE RESIDUES. IT IS ALSO KNOWN THAT HIGH CONCENTRATION OF THE ENZYMIC PROTEIN FAVORS THE FORMATION OF ITS TETRAMERIC ACTIVE FORM AND THE SAME IS ACHIEVED INDIRECTLY WITH ADDITION OF COMPATIBLE SOLUTES LIKE GLYCEROL, BETAINE PROLINE AND POLYETHYLENE GLYCOL. BASED ON THE ABOVE KNOWLEDGE WE STUDIED THE EFFECT OF ENZYMIC PROTEIN CONCENTRATION ON THE INHIBITORY ACTION OF CHEMICAL MODIFIERS OF CYSTEINE, ARGININE, HISTIDINE AND LYSINE RESIDUES, USING ENZYMIC EXTRACTS FROM LEAVES OF CYNODON DACTYLON (L.)PERS., A C4PLANT. THESE AMINO ACID RESIDUES HAVE BEEN REPORTEDAS PARTICIPATING IN THE FORMATION OF PEPCASE'S ACTIVE CENTER. IT WAS FOUND THAT THE INHIBITION OF PEPCASE BY COMPOUNDS MODIFING THE THIOL GROUPS DECREASES CONSIDERABLY WITH THE INCREASE IN THE ENZYMIC PROTEIN DIRECTLY OR INDIRECTLY (WITH INCLUSION OF COSOLUTES). ON THE CONTRARY, THE INHIBITORY EFFECT OF COMPOUNDS MODIFING ARGININE, HISTIDINE AND LYSINE RESIDUES INCREASES WITH THE INCREASE OF PROTEIN CONCENTRATION, WHEREAS A DIFFERENT RESPONSE (PROTECTIVE OR NEUTRAL) WAS OBSERVED WITH THE COMPATIBLE SOLUTES. (ABSTRACT TRUNCATED)
