AvrPphB, AvrPphF: Μελέτες δύο μολυσματικών παραγόντων από την Pseudomonas syringae pv. phaseolicola

Gazi, Anastasia D

Γαζή, Αναστασία Δ

Πανόπουλος, Νικόλαος

Τα gram αρνητικά βακτήρια χρησιμοποιούν ένα εξειδικευμένο σύστημα μεταφοράς των μολυσματικών πρωτεϊνών τους με στόχο τα ευκαρυωτικά κύτταρα. Το σύστημα αυτό έχει ονομαστεί Τύπου ΙΙΙ. Η στρατηγική των βακτηρίων είναι κοινή είτε στοχεύουν φυτικά είτε ζωικά κύτταρα. Στην παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή μελετήθηκαν οι μολυσματικoί παράγοντες AvrPphB και AvrPphF από την Pseudomonas syringae pv. phaseolicola. Οι πρωτεϊνες κλωνοποιήθηκαν σε φορέα έκφρασης με ετικέτα έξι ιστιδινών και έγιναν προσπάθειες καθαρισμού τους. Στην περίπτωση της AvrPphB τα δύο σημειακά μεταλλάγματα G63A και G63E που μελετήθηκαν έδειξαν ότι πρωτεολύονται όπως και η αγρίου τύπου πρωτεϊνη. Στην περίπτωση του μολυσματικού παράγοντα AvrPphF, τα δύο ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης του οπερονίου του θυμίζουν την στρατηγική τσαπερόνης- μολυσματικής πρωτεϊνης που χρησιμοποιούν κατά κανόνα τα ζωικά παθογόνα βακτήρια. In silico μελέτες προβλέπουν όμοια δευτεροταγή δομή του ORF1 με τις τσαπερόνες του εκκριτικού συστήματος τύπου ΙΙΙ, ενώ κατασκευάζεται ομόλογο μοντέλο στον χώρο με βάση την μήτρα της CesT (type III chaperone από την EPEC E.coli). Από την άλλη, πειράματα συνκαθαρισμού δείχνουν το ORF1 να αλληλεπιδρά με το αμινοτελικό άκρο του ORF2, υποστηρίζοντας επίσης αυτή τη θεώρηση. (EL)

Gram negative bacteria use a highly sophisticated secretion system for protein delivery into the eukaryotic host cells, the type III secretion system. The strategy they use is conserved among plant and animal pathogens. In this thesis the studies of the type III effectors AvrPphB and AvrPphF from Pseudomonas syringae pv. phaseolicola are demonstrated. The proteins were cloned to expression vectors carrying a 6-His tag and purification experiments took place. The two sitedirected mutants of AvrPphB G63A and G63E show proteolytic cleavage like the wild type protein. In the case of AvrPphF, the two open reading frames that constitute its operon suggest the common strategy of animal pathogens of a type III chaperone and its cognate effector. In silico studies predict a type III chaperon like secondary structure for ORF1 and produce a homology model based on CesT template (type III chaperone from EPEC E.coli). Co- purification experiments also suggest interaction between ORF1 and the aminoterminal part of ORF2. (EN)

text

Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

Πανεπιστήμιο Κρήτης

E-Locus Ιδρυματικό Καταθετήριο

Elocus

Ελληνική γλώσσα

2002-11-22

2002-12-09

uch.biology.msc//2002gazi

http://elocus.lib.uoc.gr:443/dlib/1/b/a/metadata-dlib-2002gazi.tkl

Σχολή/Τμήμα--Σχολή Θετικών και Τεχνολογικών Επιστημών--Τμήμα Βιολογίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης