Η πίννα η ευγενής (Pinna nobilis) είναι ενδημικό είδος και το μεγαλύτερο δίθυρο μαλάκιο της
Μεσογείου, φτάνει έως και 120 εκ. μήκος και απαντάται σε μαλακό υπόστρωμα. Τα τελευταία
χρόνια ο πληθυσμός της πίννας έχει μειωθεί δραματικά, ξεκινώντας με μαζικές θνησιμότητες
πληθυσμών στην Ισπανία και πλέον σε όλη τη Μεσόγειο, συμπεριλαμβανομένης και της
Ελλάδας. Το φαινόμενο μαζικής θνησιμότητας (mass mortality event – MME) έχει αποδοθεί,
μεταξύ άλλων, σε μια παρασιτική νόσο από το πρωτόζωο Haplosporidium pinnae, το οποίο έχει
εντοπιστεί ιστολογικά και μοριακά σε ιστούς ασθενών ατόμων. Η ένταση του φαινομένου
οδήγησε στην αλλαγή της κατάστασης του είδους από απειλούμενο σε κρισίμως κινδυνεύον
από την IUCN το Δεκέμβριο του 2019. Στην παρούσα μελέτη έγινε μοριακή ανάλυση για την
παρουσία του H. pinnae σε 16 άτομα P. nobilis από ένα νέο πληθυσμό στον Αμβρακικό κόλπο
και 26 βενθικούς οργανισμούς από περιοχές στις οποίες ήταν γνωστή η παρουσία της πίννας,
για να γίνει αξιολόγηση της κατάστασης του πληθυσμού και διερεύνηση της ύπαρξης
ενδιάμεσων ξενιστών για το H. pinnae. Επιπλέον, έγινε μοριακή ανάλυση για το βακτήριο
Mycobacterium sp. σε 38 άτομα P. nobilis και αναλύσεις μετακωδικοποίησης για τα γονίδια 18S
και 16S rRNA για να ελεγχθεί η παρουσία του παράσιτου H. pinnae και των βακτηρίων
Mycobacterium spp. και Vibrio spp., αλλά και για τη σύγκριση του ευκαρυωτικού και
προκαρυωτικού μικροβιώματος ενός φαινομενικά υγειούς πληθυσμού με το μικροβίωμα
ασθενών πληθυσμών. Κανένας βενθικός οργανισμός πλην της πίννας δεν βρέθηκε θετικός στο
H. pinnae και τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν ότι ο πληθυσμός του Αμβρακικού ήταν υγιής
(αρνητικός), ενώ οι υπόλοιποι πληθυσμοί ήταν ασθενείς και θετικοί για Η. pinnae,
Mycobacterium spp. και Vibrio spp. Τα περισσότερα ASVs Mycobacterium spp. ταυτίστηκαν με
είδη του συμπλέγματος Μ. simiae και τα πιο άφθονα ASVs Vibrio spp. ανήκαν στον κλάδο
Splendidus, ωστόσο το V. mediterranei εντοπίστηκε σε λίγα αντίγραφα μόνο σε δύο περιοχές. Η
ανάλυση LEfSe υπέδειξε 143 γένη-δείκτες των οποίων η αφθονία διέφερε στατιστικά σημαντικά
ανάμεσα στα υγιή και ασθενή άτομα. Πιο άφθονα στις υγιείς πίννες ήταν τα γένη Rubritalea,
Novosphingobium, Bradyrhizobium και στα ασθενή τα Mycobacterium, Haplosporidium και
Vibrio, τα οποία είναι γνωστά παθογόνα της πίννας, αλλά και λοιποί οργανισμοί που έχουν
ενδεχομένως ευκαιριακά παθογόνο δράση, όπως τα Endozoicomonas, Psychrilyobacter,
Acinetobacter, Pseudoalteromonas και Legionella. Συνολικά, τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν
τον ρόλο του H. pinnae ως πρωταρχικό παθογόνο, το οποίο προκαλεί διαταραχή του
μικροβιώματος και την επακόλουθη αύξηση ευκαιριακών παθογόνων που συντελούν στη
θνησιμότητα της πίννας.
(EL)
Pinna nobilis, also known as the noble pen shell, is an endemic fan mussel, the largest bivalve
mollusk of the Mediterranean Sea, reaching up to 120 cm length, and it is found in a range of
depths between 0.5 and 60 m in soft substrate and seagrass meadows. During the last years, the
pen shell populations have decreased drastically, beginning from Spain, and spreading to the rest
of the Mediterranean basin, including Greece. The mass mortality event (MME) has been
attributed, among other causes, to a parasitic disease caused by the novel protozoan
Haplosporidium pinnae, which has been identified with histology and molecular techniques in
the tissues of sick individuals. The magnitude of the phenomenon led to the change of the fan
mussel’s status to Critically Endangered by the IUCN in December 2019. In this study, a PCR was
conducted to identify the presence of the parasite in 16 P. nobilis individuals from Amvrakikos
Gulf and in 26 benthic metazoans from locations where P. nobilis was known to exist, to assess
the new population’s health condition and to investigate the existence of intermediate hosts for
H. pinnae. In addition to that, PCR for Mycobacterium was conducted in 38 P. nobilis individuals.
Lastly, a metabarcoding analysis for the 18S rRNA and 16S rRNA genes was conducted to
investigate the presence of H. pinnae, Mycobacterium and Vibrio spp., but also to compare the
eukaryotic and prokaryotic microbiome of a presumably healthy population and that of affected
(sick) populations. None of the benthic organisms, except for the pen shell, didn’t give a positive
signal for H. pinnae. The results of the PCR and the metabarcoding analysis confirmed that the
pen shells from Amvrakikos Gulf were healthy (H. pinnae negative), but the other populations
were sick and positive to H. pinnae, Mycobacterium and Vibrio spp. The majority of the ASVs of
Mycobacterium spp. were identified as species of the M. simiae complex and the most abundant
ASVs of Vibrio spp. belonged to the Splendidus clade, while V. mediterranei was identified in few
copies in only two locations. LEfSe analysis pointed out 143 biomarker genera, which differed,
statistically significantly, in abundance between healthy and sick individuals. The most abundant
genera of healthy pen shells included Rubritalea, Novosphingobium, Bradyrhizobium, while in
sick pen shells the genera Mycobacterium, Haplosporidium και Vibrio stood out, which are well
known pathogens, but also other, potentially opportunistic pathogens, like Endozoicomonas,
Psychrilyobacter, Acinetobacter, Pseudoalteromonas and Legionella. To conclude, this study’s
results confirm the role of H. pinnae as the initial disease factor, which causes a disruption of the
microbiome and the subsequent increase of opportunistic pathogens, which eventually lead to
the pen shell mass mortality.
(EN)