Απομόνωση και μελέτη του ρόλου των διαλυτών μορίων MHC τάξης II από ορό περιφερικού αίματος ανθρώπου

Το τεκμήριο παρέχεται από τον φορέα :
Πανεπιστήμιο Κρήτης   

Αποθετήριο :
E-Locus Ιδρυματικό Καταθετήριο   

δείτε την πρωτότυπη σελίδα τεκμηρίου
στον ιστότοπο του αποθετηρίου του φορέα για περισσότερες πληροφορίες και για να δείτε όλα τα ψηφιακά αρχεία του τεκμηρίου*



Isolation and study of the role of soluble MHC-II molecules from human peripheral blood serum
Απομόνωση και μελέτη του ρόλου των διαλυτών μορίων MHC τάξης II από ορό περιφερικού αίματος ανθρώπου

Καρασαχινίδης, Αναστάσιος O.

Αθανασάκη, Ειρήνη
Κοκκινίδης, Μιχαήλ

text
Τύπος Εργασίας--Μεταπτυχιακές εργασίες ειδίκευσης

2024-11-29


Τα διαλυτά μόρια του μείζονος συμπλόκου ιστοσυμβατότητας τάξης II (sMHC-II) έχουν εντοπιστεί στα σωματικά υγρά σε κατάσταση, τόσο υγείας, όσο και ασθένειας. Η μεταβολή της συγκέντρωσής τους έχει συσχετιστεί με διάφορες παθολογίες, όπως και τους έχει αποδοθεί ρόλος στην διατήρηση της ανοχής προς τον εαυτό. Έχει επίσης προταθεί ότι λειτουργούν ανταγωνιστικά με τα μεμβρανικά MHC ως προς την πρόσδεσή τους, στον υποδοχέα των Τ λεμφοκυττάρων. Ο ρόλος τους στην ρύθμιση του ανοσοποιητικού, όμως δεν είναι καλά χαρακτηρισμένος και οι περισσότερες μελέτες έχουν γίνει σε ποντίκια. Για την απομόνωση και μελέτη αυτών των μορίων δημιουργήθηκε κολώνα ανοσοσυγγένειας με την ομοιοπολική πρόσδεση του αντισώματος HB-145, με pan-HLA αντιγονική ειδικότητα, σε σφαιρίδια σεφαρόζης. Έγινε συλλογή εικοσιενός δειγμάτων ορού από περιφερικό αίμα από υγιείς δότες, στα οποία επιβεβαιώθηκε η παρουσία sMHC-II. Εξετάστηκαν διαφορετικές μέθοδοι χρήσης της κολώνας για την απομόνωση sMHC-II μορίων από ορό μεμονωμένων ατόμων, ενώ η προσπάθεια απομόνωσής τους από μείξη ορών αποδείχθηκε αναποτελεσματική. Τα απομονωμένα sMHC-II μόρια φάνηκαν να είναι ανθεκτικά σε αποδιατακτικές συνθήκες, καθώς σε πειράματα SDS-page δεν εντοπίστηκαν ξεχωριστά οι υπομονάδες τους, γεγονός που αναφέρεται και σε προηγούμενες μελέτες. Με στόχο την ανάδειξη του ανοσορυθμιστικού ρόλου των sMHC-II που απομονώθηκαν από τον δότη Human 21, παρουσία ή όχι αυτών, πραγματοποιήθηκαν καλλιέργειες σε αυτόλογα PBMCs (Peripheral Blood Mononuclear Cells), καθώς και σε αλλογενετικά PBMCs από δυο άλλους δότες, τους Donor 1 και Donor 2. Στις συνθήκες αυτές προτέθηκαν και συνθήκες in vitro ανοσοποίησης με την προσθήκη BSA (Bovine Serum Albumin) ή MLR (mixed Lymphocyte Reaction) με την προσθήκη PBMCs από άλλον δότη, τον Donor 3. Από τα συγκριτικά δεδομένα των πειραμάτων αυτών προκύπτει ότι η προσθήκη sMHC-II, προκαλεί σημαντική αύξηση του πολλαπλασιασμού των αυτόλογων όσο και των αλλογενετικών κυττάρων, μόνο παρουσία της MLR διέγερσης, καθώς και των αλλογενετικών κυττάρων του Donor 1 παρουσία της BSA. Επιπλέον από την εξέταση των επιπέδων παραγωγής αντισωμάτων, παρατηρήθηκε μείωσή τους με την προσθήκη sMHC-II στην περίπτωση των αλλογενετικών PBMCs του Donor 2. Όπως περιγράφεται και σε προηγούμενες μελέτες, παρατηρείται η σημασία ύπαρξης ανοσοδιεγερτικού ερεθίσματος για την παρατήρηση της δράσης των sMHC-II μορίων, όπως και η ικανότητά τους να δρουν κατασταλτικά στα όψιμα στάδια της χυμικής ανοσίας ακόμα και σε αλλογενετικό σύστημα. Τέλος, γίνεται εμφανής η αυξημένη δυσκολία της μελέτης των μορίων αυτών στον άνθρωπο, λόγω ετερογένειας και η ανάγκη επαναπροσέγγισης προηγούμενων πειραμάτων σε αυτόν. (EL)
The soluble forms of the major histocompatibility complex class II (sMHC-II) have been identified in bodily fluids in both health and disease. Alteration of their concentration have been associated with various pathologies, and they have been attributed a role in maintaining tolerance to self- antigens. It has also been suggested that they compete with membrane-bound MHC-II in binding to the T-cell receptor. However, their role in immune regulation remains poorly characterized, and most studies have been conducted in mice. To isolate and study these molecules, an immunoaffinity column was produced bearing a covalently linked anti-class II antibody HB-145 (pan-HLA specificity) to Sepharose beads. Twenty- one serum samples from healthy donors were collected, in which the presence of sMHC-II was confirmed. Different methods for using the affinity column to isolate sMHC-II molecules from the sera of individual subjects were examined, while the attempt to isolate them from a mixture of sera was proved ineffective. The isolated sMHC-II molecules appeared to be resistant to degrading conditions, as in SDS-page experiments their subunits were not separately identified, which has also been reported in previous studies. To explore the immunoregulatory role of the sMHC-II isolated from Donor Human 21, syngeneic PBMCs (Peripheral Blood Mononuclear Cells) as well as allogeneic PBMCs, isolated from two individuals (Donor 1 and Donor 2) were cultured, in the presence or absence of sMHC-II. In addition, in vitro immunization protocols including sensitization with BSA (Bovine Serum Albumin) or MLR (mixed Lymphocyte Reaction) performed in the presence of PBMCs from another donor (Donor 3). Comparative data from these experiments indicate that the addition of sMHC-II significantly increased the proliferation of both syngeneic and allogeneic cells, but only in the presence of the MLR stimulation, while also increasing proliferation in the case of the allogeneic cells of Donor 1 in the presence of BSA. Furthermore, by examining the levels of antibody production, a reduction was observed upon addition of sMHC-II in the case of the allogeneic PBMCs of Donor 2. As highlighted in previous studies, the presence of an immunostimulatory stimulus may be crucial for observing the activity of sMHC-II molecules. These molecules also demonstrate some capacity to promote the immune suppression during the effector stage of humoral immunity, even in an allogeneic system. Finally, it becomes apparent the increased difficulty of studying these molecules in humans due to heterogeneity and the need to revisit previous experiments in humans. (EN)


Μέγιστο σύμπλοκο
Διαλυτό μείζον σύμπλεγμα ιστοσυμβατότητας
Soluble major histocompatibility complex class II
SMHC-II
HLA-II
SHLA-II

Ελληνική γλώσσα
Αγγλική γλώσσα





*Η εύρυθμη και αδιάλειπτη λειτουργία των διαδικτυακών διευθύνσεων των συλλογών (ψηφιακό αρχείο, καρτέλα τεκμηρίου στο αποθετήριο) είναι αποκλειστική ευθύνη των αντίστοιχων Φορέων περιεχομένου.