Ανάπτυξη νανοανιχνευτών για τη στοχευμένη μοριακή ανίχνευση και απεικόνιση των μικρομεταστάσεων

Ανάπτυξη νανοανιχνευτών για τη στοχευμένη μοριακή ανίχνευση και απεικόνιση των μικρομεταστάσεων

Περικλέους Περικλής (EL)

born_digital_thesis

Διδακτορική Διατριβή (EL)

Doctoral Dissertation (EN)

2015

Εισαγωγη Η ανιχνευση των κυκλοφορουντων καρκινικων κυτταρων (CTCs) ειναι σημαντικη καθως αυτα προσδιοριζουν τη διασπορα της νοσου και την πιθανοτητα υπαρξης μικρομεταστασεων οι οποιες δεν ειναι ακομα αντιληπτες με τις κλασσικες μεθοδους. Επομενως, τα κυκλοφορουντα καρκινικα κυτταρα αποτελουν προγνωστικο δεικτη σε μεταστατικο καρκινο. Σκοπος H αναπτυξη μεθοδολογιας για την εγκαιρη ανιχνευση των CTCs με χρηση ειδικων νανοανιχνευτων βασισμενων σε αντισωματα συζευγμενα με κβαντικα κοκκια σεληνιουχου καδμιου (QDs) σε συνδυασμο με το μαγνητικο ανοσοδιαχωρισμο των CTCs. Υλικα και μεθοδολογια Αντισωματα εναντι των βιοδεικτων EpCAM και CK19, κυτταρικη σειρα DLD-1, μαγνητικα σφαιριδια συζευγμενα με στρεπταβιδινη, QDs. Η μεθοδος βασιζεται στον ανοσομαγνητικο διαχωρισμο των CTCs απο τα σωματικα υγρα και τη συζευξη τους με QDs, χρησιμοποιωντας ειδικα αντισωματα. Το σημα ανιχνευσης λαμβανεται απο τον φθορισμο των QDs. Η μεθοδος χρησιμοποιηθηκε για την ανιχνευση των κυτταρων DLD-1 και CTCs απο δειγματα περιφερικου αιματος ασθενων. Αποτελεσματα Ως ελαχιστο οριο ανιχνευσης οριστηκαν τα 10 CTCs/ml. Η ποσοτικοποιηση πραγμα- τοποιηθηκε με τη χρηση φασματοφθοριζομετρου ενω η αποδοση της μεθοδου στα δειγματα των ασθενων ελεγχθηκε με κυτταρομετρια ροης και Real time PCR. Συμπερασματα Η μεθοδος που αναπτυξαμε συμβαλλει σημαντικα στην ανιχνευση των κυκλοφορουντων καρκινικων κυτταρων, με χαμηλοτερο κοστος και σε λιγοτερο χρονο απο τις σημερα χρησιμοποιουμενες μεθοδολογιες, διασφαλιζοντας παραλληλα μεγαλη ευαισθησια. (EL)

Aim-Background To evaluate the incorporation of cadmium selenide quantum dots (QDs) in the detection of colorectal cancer (CRC) circulating tumour cell (CTC) surface antigens. Material and Methods The principle of this assay is based upon the separation of CTCs from body fluids using magnetic beads (MBs) coupled with specific antibody biomarkers, such as the Epithelial cell Adhesion Molecule Antibody (EpCAM) and Cytokeratin 19 (CK19) antibody. The detection signal was acquired from the fluorescence signal of QDs. To evaluate the performance, the method under study was used to isolate the human colon adenocarcinoma cell line (DLD-1) and CTCs from CRC patients’ peripheral blood samples. Peripheral blood samples were obtained from 9 CRC patients and 5 healthy donors who gave their informed consent to their inclusion in the study. Peripheral venous blood was sampled immediately after CRC patients had received general anaesthesia, moments before surgery. In all patients, an intravenous cannula was used to collect blood into 7 ml vacutainers containing sodium ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). The first 7 ml of blood was discarded in order to reduce the risk of contamination from skin epithelial cells. Subsequently, 30 ml samples were collected at one-minute intervals (five 6 ml aliquots per 30 ml sample). Results The limit of detection (LOD) of the methodology described in the present study was determined at 10 DLD-1 cells/ml of sample as fluorescence measured with a spectrofluorometer. Fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis and Real Time RT-PCR were also used to evaluate the performance of the method. Ultimately, in comparison to other methods currently in use, we developed a simple, sensitive, and more cost-effective method for the detection of CRC CTCs in human samples. Results were accomplished using magnetic bead isolation and subsequent QD fluorescence detection. Conclusion The present method can be readily adjusted to target a variety of proteins of either the CTCs or the host. (EN)

Ελληνική γλώσσα

Σχολή Επιστημών Υγείας » Τμήμα Ιατρικής » Τομέας Κλινικοεργαστηριακός

Βιβλιοθήκη και Κέντρο Πληροφόρησης » Βιβλιοθήκη Επιστημών Υγείας

https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Αθηνών

Πέργαμος

Διδακτορική Διατριβή