Στόχος
Στόχος της παρούσας διδακτορικής διατριβής ήταν η ανάδειξη βιοδεικτών για την
κατανόηση της αιτιοπαθογένειας, για την πρώιμη διάγνωση και την απόκριση στο
IFX. Για το σκοπό αυτό, μετρήθηκε η διαφορική έκφραση πρωτεϊνών του ορού
παιδιών και ενηλίκων με νόσο του Crohn (CD), χρησιμοποιώντας πρωτεομικές
τεχνικές. Η ομάδα των ενηλίκων περιλάμβανε άτομα στα οποία χορηγήθηκε IFX και
χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες, ανάλογα με την κλινική και ορολογική τους απόκριση
στη θεραπεία.
Υλικά & Μέθοδοι
Δείγματα ορού από ενήλικες και παιδιά με ενεργή CD και ενήλικες που
είχαν κλινική και ορολογική ύφεση (Rm), ή απόκριση (Rs) ή δεν αποκρίθηκαν
αρχικά (PNRs) στο IFX, διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση δύο διαστάσεων. Μετά τη
σχετική ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνικών κηλίδων που παρουσίαζαν διαφορική
έκφραση μεταξύ των ομάδων μέσω πυκνομέτρησης, ακολούθησε περαιτέρω
χαρακτηρισμός με MALDI-TOF-MS. Τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν με Western blot.
Αποτελέσματα
Η σύγκριση των διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών στα παιδιά και στους ενήλικες
έδειξε ότι η κλαστερίνη (CLUS) εκφραζόταν σημαντικά στους ενήλικες, ενώ η
σερουλοπλασμίνη (CERU) και η απολιποπρωτεΐνη B-100 (APOB) υπερεκφράζονται
σημαντικά στα παιδιά, δείχνοντας ότι αυτές οι εκφράσεις μπορεί να εμπλέκονται
στην πρώιμη έναρξη ή εξέλιξη της CD. Στις ομάδες PNR και Rs, η απολιποπρωτεϊνη
A-I (APOΑ1), η απολιποπρωτεϊνη E (APOE), το συμπλήρωμα C4-B (CO4B), το
πλασμινογόνο (PLMN), η σεροτρανσφερίνη (TRFE), η β-2-γλυκοπρωτεΐνη 1 (APOH),
και η κλαστερίνη (CLUS) βρέθηκαν να υπερεκφράζονται, ενώ τα επίπεδα τους δεν
παρουσίαζαν αλλαγές στην ομάδα Rm όταν συγκρίθηκαν με τις τιμές πριν τη
θεραπεία. Επιπλέον, η άλφα-2-γλυκοπρωτεΐνη πλούσια σε λευκίνη (A2GL), η
βιταμίνη D-συνδεόμενη πρωτεΐνη (VTDB), η άλφα-1B-γλυκοπρωτεΐνη (A1BG) και η C1r
υπομονάδα του συμπληρώματος (C1R) ήταν σημαντικά αυξημένες στον ορό της ομάδας
Rm.
Συμπεράσματα
Με τη χρήση των πρωτεομικών τεχνικών, εισάγονται νέοι μοριακοί δείκτες οι
οποίοι παρουσίασαν υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα, ως εκ τούτου, προσφέρεται
μια καινοτόμος προσέγγιση όσον αφορά την αξιολόγηση της απόκρισης στη θεραπεία
με IFX και της πρώιμης έναρξης της νόσου.
(EL)
Objective
Aim of this thesis was to reveale biomarkers to understand the pathogenesis,
early diagnosis and response to IFX. For this purpose, differential expression
of proteins in serum of children and adults with Crohn’s disease (CD) was
measured, using proteomic techniques. The adult group included subjects treated
with IFX and divided into three groups according to clinical and serological
response to therapy.
Materials & Methods
Serum samples from adults and children with active CD and adults who
either had achieved clinical and serological remission (Rm), or response (Rs)
and/or were primary non responders (PNRs) to IFX were subjected to
two-dimensional Gel Electrophoresis. Following relative quantitation of protein
spots exhibiting differential expression among the groups by densitometry, and
further characterization by MALDI-TOF-MS. Results were further confirmed by
Western blot analysis.
Results
Clusterin (CLUS) was found to be significantly expressed in adults,
whereas the Ceruloplasmin (CERU) and Apolipoprotein B-100 (APOB) were found to
be significantly over-expressed in children population indicating that those
expressions might be implicated on the onset or progression of CD. In the PNR
and Rs groups, apolipoprotein A-I (APOΑ1), apolipoprotein E (APOE), complement
C4-B (CO4B), plasminogen (PLMN), serotransferrin (TRFE), beta-2-glycoprotein 1
(APOH), and clusterin (CLUS) were found to be up-regulated, whereas their
levels displayed no changes in the Rm group when compared to baseline samples.
Additionally, leucine-rich alpha-2-glycoprotein (A2GL), vitamin D-binding
protein (VTDB), alpha-1B-glycoprotein (A1BG) and complement C1r subcomponent
(C1R) were significantly increased in the serum of the Rm group.
Results
Through the incorporation of proteomics technologies, novel serum
marker-molecules demonstrating high sensitivity and specificity are introduced,
hence offering an innovative approach regarding the evaluation of CD patients’
response to IFX therapy and early onset of disease.
(EN)