Το ψευδοαποφολιδωτικό σύνδρομο (Ψ/Α.Σ) αποτελεί μία εκτεταμένη εκφυλιστική
πάθηση η οποία παρουσιάζεται σε άτομα ηλικίας άνω των 40-50 ετών.
Χαρακτηρίζεται από την παραγωγή και την προοδευτική συγκέντρωση ενός ινώδους
υλικού, που ονομάζεται ψευδοαποφολιδωτικό υλικό (Ψ/Α υλικό), στους οφθαλμικούς
ιστούς, στο δέρμα και στον συνδετικό ιστό διαφόρων σπλαχνικών οργάνων. Το Ψ/Α.Σ
αποτελεί τo πιο συχνά προσδιορισμένο αίτιο μίας υποκατηγορίας χρόνιου
γλαυκώματος ανοικτής γωνίας, το ψευδοαποφολιδωτικό γλαύκωμα (Ψ/Α.Γ) και το
οποίο έχει κακή πρόγνωση.
Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η αξιολόγηση σε Ελληνικό πληθυσμό (Ήπειρος)
δύο γνωστών σημειακών πολυμορφισμών (G153D και R141L) στο γονίδιο οξειδάση της
λυσίνης-1 (LOXL1), οι οποίοι έχουν αναφερθεί πρόσφατα στη βιβλιογραφία ότι
συσχετίζονται με το Ψ/Α.Σ-Ψ/Α.Γ. Σ’ αυτή τη μελέτη, εξετάσθηκαν 291 δείγματα
DNA περιφερικού αίματος γλαυκωματικών ασθενών και υγιών μαρτύρων ίδιας
ηλικιακής κατανομής. Για τη γονοτύπωση αναπτύχθηκε και βελτιστοποιήθηκε
μεθοδολογία PCR πραγματικού χρόνου και ανάλυση καμπύλων τήξης για τους
προαναφερθέντες πολυμορφισμούς του γονιδίου LOXL1 χρησιμοποιώντας δύο
διαφορετικά κανάλια του οργάνου LightCycler (Roche), εξετάζοντας ξεχωριστά κάθε
πολυμορφισμό. H μεθοδολογία ήταν ταχεία και αξιόπιστη, επιδεικνύοντας καλή
απόδοση και επαναληψιμότητα στην ποσοτικοποίηση (αναπαραγωγιμότητα Cq CV<2,5%)
και αξιοπιστία στη γονοτύπωση (CV Tm<2,5%). Επίσης, ήταν ακριβής καθώς σε
επιλεγμένα δείγματα έγινε σύγκριση με τη μέθοδο αναφοράς DNA sequencing (100%
συμφωνία). Στη συνέχεια έγινε προσπάθεια ανάπτυξης οικονομικότερης μεθοδολογίας
που να εξετάζει ταυτόχρονα και τους δύο πολυμορφισμούς καθώς είναι κοντινοί και
μπορεί να χρησιμοποιηθεί το ίδιο PCR προϊόν: σε περιπτώσεις αμφιβολίας στην
καμπύλη τήξης, επαναλήφθηκε ξεχωριστά ο κάθε πολυμορφισμός. Από τα αποτελέσματα
επιβεβαιώνεται η σύνδεση του LOXL1 με το Ψ/Α.Σ-Ψ/Α.Γ σε Ελληνικό πληθυσμό. Η
σύνδεση του Ψ/Α.Σ-Ψ/Α.Γ με τον G153D φάνηκε να είναι λιγότερο ισχυρή στον
πληθυσμό που μελετήθηκε (Ψ/Α.Σ: OR=2,035, p=0,011, Ψ/Α.Γ: OR=2,630, p=0,003) σε
σχέση με άλλους πληθυσμούς σε διάφορες μελέτες. Ενώ για τον πολυμορφισμό R141L
η σύνδεση αποδείχθηκε μόνο για το Ψ/Α.Γ (OR=3,529, p=0,000).
(EL)
Pseudoexfoliation syndrome (PΕX) is a degenerative disease which affects
patients over 40-50 years of age. It is characterized by the production and the
progressive accumulation of a fibrillar extracellular material in ocular
tissues, skin and connective tissue of various internal organs. PEX is
recognised as the most common identifiable cause of an open- angle glaucoma
subcategory (POAG), PEX that is accompanied by bad prognosis.
The purpose of the present study was the evaluation of the association of two
polymorphisms (G153D and R141L) in lysyl oxidase like-1 gene (LOXL1) with
PEX/PEXG. In this study, 287 DNA samples of peripheral blood of patients from
Greece (Epirus) and controls were tested. A novel methodology of real-time PCR
and melting curve analysis was developed in order to genotype the G153D and
R141L polymorphisms in LOXL1 gene by using two different fluorescent channels
of the LightCycler instrument (Roche) examining each SNP separately. The
methodology was fast and reliable demonstrating good efficiency and
reproducibility in quantitation (Cq between run precision CV<2.5%) and in
genotyping (CV<2.5%). The methology was accurate as we compared it with the
reference method of DNA Sequencing. We also attempted to develop a
lost-effective methodology that examines simultaneously both SNPs which are
very close and the same PCR product can be used. In cases of doubt in the
melting curve analysis, every SNP was examined separately.
A statistically significant association was found for LOXL1 gene with PXFS-
PXFG in this Greek population. The association of PEX and PEXG with G153D
appeared to be less powerful in this population (PEX: OR=2.204, p=0.025, PEXG:
OR =2.849, p=0.001, POAG: OR=3.057, p=0.001) than in other populations and as
for R141L, the association was proved only with PEXG (OR=3.529, p=0.000).
(EN)
Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Αθηνών
