Οι πολυκυστίνες είναι μεμβρανικές πρωτεΐνες που λειτουργούν ως «μηχανο-
αισθητήρες». H PC-1 είναι ένας πρωτεϊνικός υποδοχέας συζευγμένος με G-πρωτεΐνες
και η PC-2 ένας δίαυλος διαπερατός στα ιόντα ασβεστίου. Πρόσφατες μελέτες
έδειξαν ότι οι PC-1 και PC-2 συμμετέχουν σε σημαντικές κυτταρικές λειτουργίες,
ενεργοποιώντας ενδοκυττάρια μονοπάτια σηματοδότησης, μεταξύ των οποίων το
μονοπάτι του JAK/STAT.
Σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η διερεύνηση της βιολογικής σημασίας της
μηχανοευαίσθητης πρωτεϊνης, PC-1 σε ανθρώπινους οστεοβλάστες, συσχετίζοντας τον
πιθανό ρόλο της στη μηχανική φόρτιση με τη ρύθμιση του σηματοδοτικού μονοπατιού
JAK/STAT.
Για το σκοπό αυτό αρχικά, επιβεβαιώσαμε την έκφραση των PC-1 και PC-2 σε
ανθρώπινους οστεοβλάστες, με τεχνικές ανοσοφθορισμού και ανοσοστύπωσης Western.
Στη συνέχεια, επιβεβαιώσαμε την αλληλεπίδραση των πρωτεϊνικών μορίων PC-2,
PC-1, και PC-1, pJAK2 μέσω της τεχνικής ανοσοφθορισμού Duolink. Ακολούθως,
αποδείξαμε μέσω κυτταρομετρίας ροής την PC-1-μεσολαβούμενη ενεργοποίηση του
σηματοδοτικού μονοπατιού JAK/STAT μετά από μηχανική διέγερση. Με τη μέθοδο
TransAM, παρατηρήθηκε ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα pSTAT3 μετά από
μηχανική τάση. Τέλος, αποδείξαμε μέσω της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης
αντίστροφης μεταγραφής, τη ρύθμιση της έκφρασης του οστεοβλαστοειδικού γονιδίου
runx2 από το JAK2/STAT3 άξονα.
Η παρούσα μελέτη υποδεικνύει τη διαμεσολάβηση της μηχανοευαίσθητης πρωτεϊνης
PC-1 και του σηματοδοτικού μονοπατιού JAK/STAT στη μηχανοδιέγερση των
οστεοβλαστών, τη ρύθμιση της κυτταρικής διαφοροποίησης και οστικής
ανακατασκευής.
(EL)
Polycystins are membrane proteins that function as "mechanosensors." PC-1 is
G-protein coupled receptor and PC-2 is a channel permeable to calcium ions.
Recent studies showed that PC-1 and PC-2 participate in important cellular
functions by activating intracellular signaling pathways, including the
JAK/STAT pathway.
The purpose of this study is to investigate the biological significance of the
mechanosensitive protein, PC-1 in human osteoblasts, correlating the possible
role of the mechanical loading on the regulation of JAK/STAT signaling pathway.
For this purpose, we confirmed the expression of PC-1 and PC-2 in human
osteoblasts, by immunofluorescence techniques and Western immunoblotting. Then,
we confirmed the interaction of protein molecules PC-2, PC-1, and PC-1, pJAK2
through the immunofluorescence technique, Duolink. Subsequently, we showed by
flow cytometry the PC-1-mediated activation of the signaling pathway JAK/STAT
after mechanical stimulation. Activation of the transcription factor pSTAT3
after mechanical stress was observed using the method TransAM. Finally, we
showed by polymerase chain reaction reverse transcriptase, the regulation of
osteoblastic gene Runx2 expression of the JAK/STAT axis.
This study indicates the mediation of the mechanosensitive protein, PC-1 and
JAK/STAT signaling pathway in osteoblasts’ mechanostimulation, regulation of
cell differentiation and bone remodeling.
(EN)
/aggregator-openarchives/portal/institutions/uoa
